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FITC标记蛋白方法 已有1人参与
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本人最近在做FITC标记溶菌酶的一个实验，文献写的是混合低温搅拌2小时，之后离心除去不溶物取上清液透析 过柱就可得到标记的蛋白。投了几次反应之后取上清液测紫外，发现蛋白含量很少。进行透析之后溶液没有颜色了。后来我反应了7小时，离心有好多沉淀，测紫外发现蛋白质都沉底了。我在网上和论坛也搜了一些文献，说的不是特别详细，不知道怎么算标记上了。有没有师兄师姐做过FITC标记蛋白的实验，本人是研1新生，求大神们帮忙解释一下。谢谢了。 @hc-material @gyesang 发自小木虫IOS客户端 |
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- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
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Procedure 1. Dissolve protein and FITC in carbonate-bicarbonate buffer. 2. Slowly add FITC to protein with stirring. Cover with foil and stir 2 hours at room temperature. 3. Separate conjugate from free FITC on G-25 column. Collect fractions. 4. Pool fractions containing conjugate. 5. Determine F/P ratio of conjugate spectrophotometrically. 6. Stabilize with 1% bovine serum albumin and 0.1% sodium azide and store at 0-5 °C. 可试试室温搅拌 |
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