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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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花梨酱

新虫 (小有名气)

[求助] 求助小木虫的各位大神前辈们 已有1人参与

要做抗菌实验,复苏了保存在-20°冰箱里的菌种(金黄色葡萄球菌ATCC25923)。取了200微升加入到3毫升LB液体培养基中,培养了大概两个小时,管壁有明显气泡产生。我振摇之后,继续培养了四个小时。但菌液没有变浑浊,画板子接种到平板上也没有长出菌落。到底是哪里出了点问题啊,之前复活的菌也是液体培养基培养有气泡产生,但是培养了一天也不浑浊,接到固体培养基上也长不出来菌落。
跪求解答~跪求解答呀

@天使托 发自小木虫Android客户端
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木虫 (正式写手)

复苏了就不应该放在—20里,要么放4度,要么常温。不加冻存液,-20会将菌冻死,原理你应该知道吧。

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Lifeislonely,youneverfeelit.
2楼2018-11-21 08:48:09
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花梨酱

新虫 (小有名气)

甘油水1:1保存的,之前师兄师姐都是这么保存的

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3楼2018-11-21 09:06:57
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xiecj

木虫 (著名写手)

楼主是将冻存于-20的菌株复苏,不是复苏后又保存在-20!不过,楼上有句话说得对,你这原先的菌株有没有加甘油什么的!以及,你这细菌保存多久了?-20度不适合长期保存,我觉得可能是菌株活力不够了,你先试着接着多摇一段时间,比如8小时以上,看看是否浑浊

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4楼2018-11-21 09:08:52
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花梨酱

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xiecj at 2018-11-21 09:08:52
楼主是将冻存于-20的菌株复苏,不是复苏后又保存在-20!不过,楼上有句话说得对,你这原先的菌株有没有加甘油什么的!以及,你这细菌保存多久了?-20度不适合长期保存,我觉得可能是菌株活力不够了,你先试着接着多 ...

培养了一夜了,还是不浑浊

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5楼2018-11-21 09:12:03
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花梨酱

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 花梨酱 at 2018-11-21 09:12:03
培养了一夜了,还是不浑浊
...

甘油水1:1保存的。保存了一年半吧

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6楼2018-11-21 09:12:32
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xiecj

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 花梨酱 at 2018-11-21 09:12:32
甘油水1:1保存的。保存了一年半吧
...

应该放-80的,估计细菌活力不行了

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7楼2018-11-21 12:15:26
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1034714749

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
snoopytbw: 金币+3, 鼓励 2018-11-21 17:04:55
看完了楼上的评论,大体总结一下:
-20℃在甘油1:1的情况下不适合保存1年半那么久的,短期内保存个1月2个月还好,里面的菌可能所剩无几,或者活性非常低了。
解决:
1.多培养几天,看菌体是否还能长起来,如果长起来,多转接几次还是能恢复的
2.还有多少冻存的菌,留下一管,其他都培养了吧,挽救菌株是比较重要的
3.-20℃只能短期内存放,我们实验室短期存放也是要冻存在-40℃的,很少-20℃冻存菌株,而且会在-80℃冰箱里冻存一管备用,一旦有其他发现用途,或者为了建库,还要冻干后-80℃保存菌粉。
8楼2018-11-21 14:49:51
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花梨酱

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 1034714749 at 2018-11-21 14:49:51
看完了楼上的评论,大体总结一下:
-20℃在甘油1:1的情况下不适合保存1年半那么久的,短期内保存个1月2个月还好,里面的菌可能所剩无几,或者活性非常低了。
解决:
1.多培养几天,看菌体是否还能长起来,如果长 ...

谢谢解答。正在全力挽救菌株。若不行可能要买了

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9楼2018-11-21 15:04:17
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