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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 真菌DNA扩增后跑胶出现问题
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wzh0209

木虫 (正式写手)

[交流] 真菌DNA扩增后跑胶出现问题

真菌提取DNA后的进行了相关基因的PCR之后，进行琼脂糖凝胶的检测，之前做的都可以跑出目的条带，但是现在的却得不到目的条带，结果如下图，我的DNA 放置了将近4个月了，请各位高手帮忙分析原因，谢谢.

[ Last edited by wzh0209 on 2009-4-24 at 18:06 ]
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1楼 2009-04-24 18:04:23
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Sarah_Shy

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极分享奖 4-25 00:56
4个月？差不多都降解了吧。即使没降解，放那么久做PCR影响也很大了。建议楼主重提DNA吧~
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2楼2009-04-24 23:40:59
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lcx_2008

木虫 (小有名气)
我做反转录时，最后的PCR产物跑胶时也出现过这种现象。我的RNA CDNA都是当天提取并合成的（RNA的提取和CDNA的合成都是用的试剂盒），也是当天进行的PCR，结果跑胶时就出现这种情况，我也不知道是什么原因呢，请高手指点，谢谢！！！
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3楼2009-04-28 09:21:24
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wzh0209

木虫 (正式写手)
谢谢交流，现在我进行了DNA重新提取，但是PCR之后的结果还是这样的？请帮忙分析原因！谢谢了！
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4楼2009-04-29 15:38:12
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spiderboy

金虫 (正式写手)
楼主，再检查一下你PCR设计的引物，出现不了目的条带，一般是引物出了问题。。。当然，首先要保证你的操作没有问题。。。

如果不麻烦的话，能不能把你的实验具体情况发在贴里，这样大家方便交流。。比如P什么片段，P的条件之类的。。。
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5楼2009-04-29 16:56:04
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spiderboy

金虫 (正式写手)
二楼的虫虫，我觉得你出现这样的情况很有可能是在实验操作过程中受RNA酶的污染了，，建议你再重新检查下实验过程，翻下笔记，所用的所有东西都要严格按照做RNA的相关要求。。。
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6楼2009-04-29 16:58:08
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smallcat227

木虫 (著名写手)
出现这样的条带似乎多半是模板问题，不过既然你已经直接提了，可以试试降下模板浓度，适当提高退火温度和减少循环次数
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7楼2009-04-29 21:28:38
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lcx_2008

木虫 (小有名气)
谢谢指点！！
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8楼2009-05-03 13:52:06
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紫天图

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫特级潜水员
造成这种现象的原因很多，你最好把详细的操作过程贴上来，不然很难回答你的提问。
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9楼2009-05-03 16:44:19
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紫天图

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫特级潜水员
我也做过真菌，曾遇到过类似问题。
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10楼2009-05-03 16:45:16
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