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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » his标签蛋白纯化后有沉淀
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沫子大大

新虫 (小有名气)

[求助] his标签蛋白纯化后有沉淀已有1人参与

用不同浓度de咪唑洗脱的，从50mM开始出现沉淀，当时洗脱的时候没有，放冰箱一夜就出现沉淀了，是什么原因

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1楼2018-11-15 15:13:53
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匿名

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2楼2018-11-15 15:32:02
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
不要在咪唑溶液中长期保存蛋白，洗脱后把蛋白换到无咪唑的缓冲液中，混入少量甘油后，用液氮速冻，-80C保存

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2018-11-16 00:02:02
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
（1）出现浑浊，说明蛋白处在不稳定的环境中或者自身就不稳定，所以要检查缓冲体系是否正确，环境是否低温，或在缓冲液中加入还原剂DTT。
（2）加入肌氨酸钠，迅速使蛋白变性，消除浑浊现象。
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生活活生生累死
4楼2018-11-16 08:51:06
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沫子大大

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 龙腾92 at 2018-11-15 15:32:02
你用的ph值是多少？可能ph太接近等电点了，升高一点ph值就不会了，

谢谢，后来我立马把咪唑洗脱掉就好了

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5楼2018-11-28 20:45:18
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沫子大大

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2018-11-16 00:02:02
不要在咪唑溶液中长期保存蛋白，洗脱后把蛋白换到无咪唑的缓冲液中，混入少量甘油后，用液氮速冻，-80C保存

嗯，超滤浓缩后就好了

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6楼2018-11-28 20:45:36
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沫子大大

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bio转录组 at 2018-11-16 08:51:06
（1）出现浑浊，说明蛋白处在不稳定的环境中或者自身就不稳定，所以要检查缓冲体系是否正确，环境是否低温，或在缓冲液中加入还原剂DTT。
（2）加入肌氨酸钠，迅速使蛋白变性，消除浑浊现象。

谢谢，超滤浓缩后就没有沉淀了

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7楼2018-11-28 20:45:54
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