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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pet-28a两端的his-tag总共多大啊
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GinTonic

金虫 (小有名气)

[交流] pet-28a两端的his-tag总共多大啊

最近将一225bp的目的基因插入到了pet-28a中，诱导表达后在page胶上看不出明显的目的条带，用一抗为抗his标签的抗体做western检测，有条带但是在17kd的上方，我的目的基因表达出来应该是7.5kd，我读了质粒图谱，觉得两端得到his加起来也就4.5kd，因此我的融合蛋白应该在17以下才对，真是晕了现在，我看文献里说pet-32a的his共有14kd左右，这两个是不同的载体，不知道我的pet-28a的his-tag表达后是多大啊？
哪位虫虫能帮帮我啊 急死了啊
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1楼 2009-04-21 17:44:41
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yuhuimeiye

木虫 (著名写手)
28的标签很小，28的比32的明显小很多。28和原蛋白大小相比大不了多少。
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2楼2009-04-22 01:07:52
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
★
GinTonic(金币+1,VIP+0):文章很好啊 很有借鉴意义啊 我准备去测序看看 4-22 14:18
据说带有his tag标签的蛋白表观分子量会比实际分子量大，
可以参阅“SDS-PAPGE法测定His-tag融合蛋白分子量产生偏差的原因”这篇文献，可以从CNKI下载。
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3楼2009-04-22 08:01:08
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黑罕

金虫 (小有名气)
GST大约为26KD
his标签很小,融合蛋白和原蛋白大小相比大不了多少
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4楼2009-04-22 09:10:59
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lifefamily

我记得28a只是在N端有his啊，C端没有吧？是移码了的！
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5楼2009-04-22 11:42:19
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GinTonic

金虫 (小有名气)
C端也有的，我也知道是很小，但是究竟多大啊
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6楼2009-04-22 13:09:39
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hongkaichen

金虫 (小有名气)
我觉的这个就是你的目的蛋白，不过如果跑PAGE胶看不到的话，那么可能是你的蛋白表达量比较小。
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7楼2009-04-22 19:15:03
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xiaoli12

木虫 (正式写手)
★
GinTonic(金币+1,VIP+0): 5-4 11:27
28a 目的基因两端各有一个HIS tag，即六个组氨酸，另外5‘端还包含了一个T7tag,及九个连接氨基酸，就到了第一个限制性酶切位点BamH I，即除了你的目的，如果是第一个酶切位点连入，则外加23个氨基酸。
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8楼2009-04-23 10:13:21
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GinTonic

金虫 (小有名气)
要是按照“SDS-PAPGE法测定His-tag融合蛋白分子量产生偏差的原因”这篇文献的分析，觉得有这种可能情况啊 感谢各位啊
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9楼2009-04-23 15:24:42
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lifefamily

我告诉你楼主，单纯的HIS tag，跑在SDS-PAGE上就是1k的大小。
就是说，带和不带的就只相差1k
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10楼2009-04-27 09:30:24
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