24小时热门版块排行榜    

查看: 2553  |  回复: 15
当前主题已经存档。

GinTonic

金虫 (小有名气)

[交流] pet-28a两端的his-tag总共多大啊

最近将一225bp的目的基因插入到了pet-28a中,诱导表达后在page胶上看不出明显的目的条带,用一抗为抗his标签的抗体做western检测,有条带但是在17kd的上方,我的目的基因表达出来应该是7.5kd,我读了质粒图谱,觉得两端得到his加起来也就4.5kd,因此我的融合蛋白应该在17以下才对,真是晕了现在,我看文献里说pet-32a的his共有14kd左右,这两个是不同的载体,不知道我的pet-28a的his-tag表达后是多大啊?
哪位虫虫能帮帮我啊 急死了啊
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuhuimeiye

木虫 (著名写手)

28的标签很小,28的比32的明显小很多。28和原蛋白大小相比大不了多少。
2楼2009-04-22 01:07:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)


GinTonic(金币+1,VIP+0):文章很好啊 很有借鉴意义啊 我准备去测序看看 4-22 14:18
据说带有his tag标签的蛋白表观分子量会比实际分子量大,
可以参阅“SDS-PAPGE法测定His-tag融合蛋白分子量产生偏差的原因”这篇文献,可以从CNKI下载。
3楼2009-04-22 08:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑罕

金虫 (小有名气)

GST大约为26KD
his标签很小,融合蛋白和原蛋白大小相比大不了多少
4楼2009-04-22 09:10:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

我记得28a只是在N端有his啊,C端没有吧?是移码了的!
5楼2009-04-22 11:42:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

GinTonic

金虫 (小有名气)

C端也有的,我也知道是很小,但是究竟多大啊
6楼2009-04-22 13:09:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongkaichen

金虫 (小有名气)

我觉的这个就是你的目的蛋白,不过如果跑PAGE胶看不到的话,那么可能是你的蛋白表达量比较小。
7楼2009-04-22 19:15:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoli12

木虫 (正式写手)


GinTonic(金币+1,VIP+0): 5-4 11:27
28a 目的基因两端各有一个HIS tag,即六个组氨酸,另外5‘端还包含了一个T7tag,及九个连接氨基酸,就到了第一个限制性酶切位点BamH I,即除了你的目的,如果是第一个酶切位点连入,则外加23个氨基酸。
8楼2009-04-23 10:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

GinTonic

金虫 (小有名气)

要是按照“SDS-PAPGE法测定His-tag融合蛋白分子量产生偏差的原因”这篇文献的分析,觉得有这种可能情况啊 感谢各位啊
9楼2009-04-23 15:24:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

我告诉你楼主,单纯的HIS tag,跑在SDS-PAGE上就是1k的大小。
就是说,带和不带的就只相差1k
10楼2009-04-27 09:30:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 GinTonic 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见