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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pet-28a两端的his-tag总共多大啊
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dabin_hj01

铜虫 (初入文坛)
可以将你插入后的表达载体，送去测序，读码框没错的话，并且能杂交出带来，是不是可以肯定就是你想要的那？
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11楼2009-04-27 16:52:30
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GinTonic

金虫 (小有名气)
谢谢各位的帮助，测序的结果终于出来了，插入的225bp片段完全正确，但是跑page胶做western还是在17kd左右。现在的问题是只能在western上看的到 但是page上难以判断，这么少的量还要做纯化咋搞啊
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12楼2009-05-13 11:57:27
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lifefamily

在pET系列中表达量少是很正常的事情。
通常我们是采用 GST或者Trx或者GB1融合表达。
如果融合后还是少，那就基本上没脾气了……
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13楼2009-05-13 15:12:18
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wwwttt179

铁虫 (初入文坛)
我想问一下楼主
你是用多大浓度的胶跑的电泳啊
我目的带只有12K
跑15%的胶好模糊啊
求助一下
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14楼2009-05-17 11:46:10
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
你跑电泳的时候有空白对照的吗？有的话最好根据对照来区分，蛋白质的maker一般不会很准确的说明分子量的
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15楼2009-05-17 13:31:00
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GinTonic

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wwwttt179 at 2009-5-17 11:46:
我想问一下楼主
你是用多大浓度的胶跑的电泳啊
我目的带只有12K
跑15%的胶好模糊啊
求助一下

我的也很模糊啊 western是10%的 跑的时间短，但是跑page时候很模糊
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16楼2009-05-18 13:11:28
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