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GinTonic

金虫 (小有名气)

[交流] pet-28a两端的his-tag总共多大啊

最近将一225bp的目的基因插入到了pet-28a中,诱导表达后在page胶上看不出明显的目的条带,用一抗为抗his标签的抗体做western检测,有条带但是在17kd的上方,我的目的基因表达出来应该是7.5kd,我读了质粒图谱,觉得两端得到his加起来也就4.5kd,因此我的融合蛋白应该在17以下才对,真是晕了现在,我看文献里说pet-32a的his共有14kd左右,这两个是不同的载体,不知道我的pet-28a的his-tag表达后是多大啊?
哪位虫虫能帮帮我啊 急死了啊
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lifefamily

在pET系列中表达量少是很正常的事情。
通常我们是采用 GST或者Trx或者GB1融合表达。
如果融合后还是少,那就基本上没脾气了……
13楼2009-05-13 15:12:18
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yuhuimeiye

木虫 (著名写手)

28的标签很小,28的比32的明显小很多。28和原蛋白大小相比大不了多少。
2楼2009-04-22 01:07:52
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)


GinTonic(金币+1,VIP+0):文章很好啊 很有借鉴意义啊 我准备去测序看看 4-22 14:18
据说带有his tag标签的蛋白表观分子量会比实际分子量大,
可以参阅“SDS-PAPGE法测定His-tag融合蛋白分子量产生偏差的原因”这篇文献,可以从CNKI下载。
3楼2009-04-22 08:01:08
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黑罕

金虫 (小有名气)

GST大约为26KD
his标签很小,融合蛋白和原蛋白大小相比大不了多少
4楼2009-04-22 09:10:59
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