应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何以质粒为模板PCR？
121/2返回列表12下一页
查看: 1064  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 如何以质粒为模板PCR？

各位虫友，大家好。我想以质粒（目的基因连到T载体）做模板做PCR，大家给推荐一下质粒稀释倍数吧，谢谢。最下面是marker,上面是目的基因和质粒。

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:11 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-04-20 16:36:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hbxjh1984

铜虫 (初入文坛)

为什么要提质粒呢？

我构建的细菌克隆文库，也是连接在T载体上，培养的液体大肠杆菌克隆子25微升体系加2微升菌液就可以了！
赞一下 回复此楼
2楼2009-04-20 16:47:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
1000倍
回复此楼
3楼2009-04-20 19:53:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
直接取0.5-1微升做模版，不用稀释也行
赞一下 回复此楼
4楼2009-04-20 20:10:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hbxjh1984 at 2009-4-20 16:47:
我构建的细菌克隆文库，也是连接在T载体上，培养的液体大肠杆菌克隆子25微升体系加2微升菌液就可以了！

谢谢。我开始的时候用菌液PCR检测阳性克隆，是P出来了，可是之后用同一菌液、同样的体系就是P不出来，所以想用质粒做模板，毕竟质粒比菌液纯多了……不知道要稀释多少倍……
赞一下 回复此楼
5楼2009-04-20 20:51:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by guoqin_shiyin at 2009-4-20 20:10:
直接取0.5-1微升做模版，不用稀释也行

谢谢。不过不稀释的话模板浓度太高了吧?
赞一下 回复此楼
6楼2009-04-20 20:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
估计lz拿到的是连T载保存的目的基因。
我遇到和楼主相同的情况，从跑胶情况看稀释20-40倍25ul体系加1ul模板p试试。
实在不行，多稀释几个倍数分别做做，看那种效果好。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
7楼2009-04-20 20:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-4-20 20:54:
估计lz拿到的是连T载保存的目的基因。
我遇到和楼主相同的情况，从跑胶情况看稀释20-40倍25ul体系加1ul模板p试试。
实在不行，多稀释几个倍数分别做做，看那种效果好。

谢谢
回复此楼
8楼2009-04-20 21:13:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
浓度高有什么关系，只要能扩增出目的基因就行了。
我一般取0.5微升直接扩增的。如果你觉得浓度还高，取0.3就够了。
赞一下 回复此楼
9楼2009-04-20 22:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by guoqin_shiyin at 2009-4-20 22:44:
浓度高有什么关系，只要能扩增出目的基因就行了。
我一般取0.5微升直接扩增的。如果你觉得浓度还高，取0.3就够了。

谢谢
回复此楼
10楼2009-04-21 11:05:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 x8q4h11 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境调剂 +3 chenhanheng 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:37 by houyaoxu
[考研] 085600求调剂 +3 LRZZZZZZ 2026-03-02 3/150 2026-03-02 16:58 by zeng1010
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +12 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 12/600 2026-03-02 16:18 by youmomaoyan
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 9/450 2026-03-02 13:31 by njzyff
[考研] 0805总分292，求调剂 +8 幻想之殇 2026-03-01 8/400 2026-03-02 12:51 by 无际的草原
[考研] 272求调剂 +7 材紫有化 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:48 by 无际的草原
[基金申请] 成果系统访问量大，请15分钟后再尝试。由此给您造成的不便，敬请谅解。 +5 xhuama 2026-03-02 5/250 2026-03-02 12:34 by stidwellNK
[考研] 295求调剂 +8 19171856320 2026-02-28 8/400 2026-03-02 11:19 by yuchj
[基金申请] 此成果不能导入原因：元数据必填信息不完整，可 进行补充。 +4 Kittylucky 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:07 by jurkat.1640
[考研] 264求调剂 +4 巴拉巴拉根556 2026-02-28 4/200 2026-03-02 10:48 by yuchj
[考研] 0854复试调剂 276 +4 wmm9 2026-03-01 6/300 2026-03-02 09:28 by 热情沙漠
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭