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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 如何以质粒为模板PCR?

各位虫友,大家好。我想以质粒(目的基因连到T载体)做模板做PCR,大家给推荐一下质粒稀释倍数吧,谢谢。最下面是marker,上面是目的基因和质粒。

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:11 ]
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by guoqin_shiyin at 2009-4-20 22:44:
浓度高有什么关系,只要能扩增出目的基因就行了。
我一般取0.5微升直接扩增的。如果你觉得浓度还高,取0.3就够了。

谢谢
10楼2009-04-21 11:05:10
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hbxjh1984

铜虫 (初入文坛)

为什么要提质粒呢?

我构建的细菌克隆文库,也是连接在T载体上,培养的液体大肠杆菌克隆子25微升体系加2微升菌液就可以了!
2楼2009-04-20 16:47:13
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

直接取0.5-1微升做模版,不用稀释也行
4楼2009-04-20 20:10:59
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hbxjh1984 at 2009-4-20 16:47:
我构建的细菌克隆文库,也是连接在T载体上,培养的液体大肠杆菌克隆子25微升体系加2微升菌液就可以了!

谢谢。我开始的时候用菌液PCR检测阳性克隆,是P出来了,可是之后用同一菌液、同样的体系就是P不出来,所以想用质粒做模板,毕竟质粒比菌液纯多了……不知道要稀释多少倍……
5楼2009-04-20 20:51:13
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