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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何以PCR产物做PCR
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 如何以PCR产物做PCR

我提了很长时间的RNA，终于反转录 PCR成功，但是得到的目的基因条带较弱，链接到T载体没成功；我的割胶回收产物稀释多少倍做模板继续PCR较合适？
谢谢

[ Last edited by amisking on 2009-8-10 at 22:17 ]
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1楼 2009-04-18 19:34:22
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咖啡加点盐7630

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得是模板浓度太稀了。。。

胶回收产物跑胶定个量吧，50微升体系模板不少于20ng（片段短的话可以再少一点）
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All this for a loaf of bread？
13楼2009-08-10 23:58:03
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mofatuzi

新虫 (小有名气)
不用稀释，取一微升做模板。或者严格做就用TAQ酶做梯度
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2楼2009-04-18 20:24:45
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by mofatuzi at 2009-4-18 20:24:
不用稀释，取一微升做模板。或者严格做就用TAQ酶做梯度

谢谢！你指的是用50微升体系吗？但是我觉得是不是模板浓度有点高？
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3楼2009-04-18 20:34:18
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daigakusei

铁虫 (初入文坛)
你可以把模板稀释10、50、100倍后试用
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4楼2009-04-18 21:58:29
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