24小时热门版块排行榜    

查看: 743  |  回复: 14
当前主题已经存档。

x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 如何以PCR产物做PCR

我提了很长时间的RNA,终于反转录 PCR成功,但是得到的目的基因条带较弱,链接到T载体没成功;我的割胶回收产物稀释多少倍做模板继续PCR较合适?
谢谢

[ Last edited by amisking on 2009-8-10 at 22:17 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mofatuzi

新虫 (小有名气)

不用稀释,取一微升做模板。或者严格做就用TAQ酶做梯度
2楼2009-04-18 20:24:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by mofatuzi at 2009-4-18 20:24:
不用稀释,取一微升做模板。或者严格做就用TAQ酶做梯度

谢谢!你指的是用50微升体系吗?但是我觉得是不是模板浓度有点高?
3楼2009-04-18 20:34:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daigakusei

铁虫 (初入文坛)

你可以把模板稀释10、50、100倍后试用
4楼2009-04-18 21:58:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

应该多稀释点,如楼上所说
5楼2009-04-19 06:16:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

如果你割胶回收后什么都看不见,可以不稀释,取0.5微升就可以了.如果马马虎虎看得见,还是稀释10倍以上吧.
我用割胶回收的产物再做PCR没有问题,条带很特异.
6楼2009-04-19 09:46:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by shizishanshang at 2009-4-19 09:46:
如果你割胶回收后什么都看不见,可以不稀释,取0.5微升就可以了.如果马马虎虎看得见,还是稀释10倍以上吧.
我用割胶回收的产物再做PCR没有问题,条带很特异.

谢谢
7楼2009-04-19 11:45:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by daigakusei at 2009-4-18 21:58:
你可以把模板稀释10、50、100倍后试用

谢谢
8楼2009-04-19 11:46:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

菊花茶

木虫 (著名写手)

也要做这些,学习学习
9楼2009-04-19 14:13:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hazhijun

新虫 (初入文坛)

现在正需要这些东西,谢谢诸位了!
10楼2009-04-19 23:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 x8q4h11 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0805 316求调剂 +4 大雪深藏 2026-03-18 4/200 2026-03-24 17:34 by dick_runner
[考研] 274求调剂 +4 顾九笙要谦虚 2026-03-24 4/200 2026-03-24 16:28 by barlinike
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 7/350 2026-03-24 15:24 by cuifj
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 07化学280分求调剂 +4 722865 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:01 by chixmc
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
请填处理意见