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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 如何以PCR产物做PCR

我提了很长时间的RNA,终于反转录 PCR成功,但是得到的目的基因条带较弱,链接到T载体没成功;我的割胶回收产物稀释多少倍做模板继续PCR较合适?
谢谢

[ Last edited by amisking on 2009-8-10 at 22:17 ]
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mofatuzi

新虫 (小有名气)

不用稀释,取一微升做模板。或者严格做就用TAQ酶做梯度
2楼2009-04-18 20:24:45
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by mofatuzi at 2009-4-18 20:24:
不用稀释,取一微升做模板。或者严格做就用TAQ酶做梯度

谢谢!你指的是用50微升体系吗?但是我觉得是不是模板浓度有点高?
3楼2009-04-18 20:34:18
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daigakusei

铁虫 (初入文坛)

你可以把模板稀释10、50、100倍后试用
4楼2009-04-18 21:58:29
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695

木虫 (职业作家)

应该多稀释点,如楼上所说
5楼2009-04-19 06:16:28
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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

如果你割胶回收后什么都看不见,可以不稀释,取0.5微升就可以了.如果马马虎虎看得见,还是稀释10倍以上吧.
我用割胶回收的产物再做PCR没有问题,条带很特异.
6楼2009-04-19 09:46:11
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by shizishanshang at 2009-4-19 09:46:
如果你割胶回收后什么都看不见,可以不稀释,取0.5微升就可以了.如果马马虎虎看得见,还是稀释10倍以上吧.
我用割胶回收的产物再做PCR没有问题,条带很特异.

谢谢
7楼2009-04-19 11:45:46
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by daigakusei at 2009-4-18 21:58:
你可以把模板稀释10、50、100倍后试用

谢谢
8楼2009-04-19 11:46:01
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菊花茶

木虫 (著名写手)

也要做这些,学习学习
9楼2009-04-19 14:13:52
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hazhijun

新虫 (初入文坛)

现在正需要这些东西,谢谢诸位了!
10楼2009-04-19 23:56:40
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