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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：关于蛋白提取的问题
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xialinfzdx

金虫 (初入文坛)

[交流] 求助：关于蛋白提取的问题

我想找一个能与promotor相结合的转录因子，用什么样的方法提取核内的蛋白质而不会影响蛋白质在体外与DNA的结合能力？
    我之前用裂解液提取，但是总没有蛋白能够binding上去，我导师说是因为裂解液里的TritonX-100影响了蛋白质与DNA的结合。
我的lysis buffer： 20mmol/L   Tris-HCl
                        150mmol/L  NaCl
                        5mmol/L      EDTA
                        10%           glycerol
                         0.1%         triton X-100

那位高手有好的提取方案，请不吝指教！！！谢谢！！！




很晕，今天查了一天的核蛋白提取方案，但是都需要高速离心，俺们实验室的离心机就到17000，达不到~还好刚才导师说有实验室可以做离心的~

[ Last edited by xialinfzdx on 2009-4-19 at 16:20 ]
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1楼 2009-04-18 18:35:16
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张力民1598

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
xialinfzdx(金币+1,VIP+0): 4-19 08:53
xialinfzdx(金币+2,VIP+0): 4-21 15:49
我觉得你应该用提取核蛋白的方法，因为转录因子发挥基因调控的功能应该在核内，提总蛋白的话会有胞浆蛋白的干扰。
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2楼2009-04-18 19:05:35
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xialinfzdx

金虫 (初入文坛)
我想知道哪种核蛋白提取方法不影响蛋白质后续与DNA的结合~
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3楼2009-04-19 08:57:21
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anik

银虫 (正式写手)
没研究过。。。
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4楼2009-04-19 13:24:45
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张力民1598

铜虫 (小有名气)
你买试剂盒吧，就是比较贵。
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5楼2009-04-20 09:30:04
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