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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细菌DNA提不出来!
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wlyu1228

新虫 (小有名气)

[交流] 细菌DNA提不出来!

大提DNA用于杂交。这种菌很容易破壁,加SDS后几分钟后就变透明,但是最后无论用异丙醇还是无水乙醇都看不出有DNA沉淀。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:01 ]
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1楼 2009-04-18 14:00:21
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guohanyan

金虫 (正式写手)
可以试试低温乙醇：按照正常的操作步骤，只是将乙醇事先密封好在冰箱里冷却24h；其次就是用0.14mol/L的NaCl溶液洗涤DNA提取物，因为DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度很低，但蛋白质的溶解度很高，这样就能洗去蛋白质。最后，可以用稀二苯胺在加热的条件下检测是否提取出了DNA（现象：变蓝）
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2楼2009-04-18 14:30:08
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随风而过

银虫 (小有名气)
用无水乙醇要低温然后离心
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3楼2009-04-29 08:02:51
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stfo

铜虫 (小有名气)
-20度至少30分钟
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4楼2009-04-29 13:57:57
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smallcat227

木虫 (著名写手)
-20度沉淀的时间长一点，然后离心的转速大一点，时间长一点，有时候确实看不到有DNA沉淀的，或者有时会看到明显的蛋白沉淀，没关系，用TE溶解后电泳检测才能知道最后结果

祝楼主好运！
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5楼2009-04-29 14:33:42
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xia710516

金虫 (正式写手)
这可能不是在沉淀这步出的问题。
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6楼2009-04-29 18:38:00
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木虫－虾米

银虫 (初入文坛)
细菌煮沸法提DNA：100摄氏度，10min；10000转离心10min，上清为所要DNA。
方法简单，可一试！
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7楼2009-04-29 18:40:36
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smallcat227

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 木虫－虾米 at 2009-4-29 18:40:
细菌煮沸法提DNA：100摄氏度，10min；10000转离心10min，上清为所要DNA。
方法简单，可一试！

楼主的菌是阴性菌么，阴性菌用煮沸法的话效果很好的，不过照理说阴性菌DNA蛮好提的
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8楼2009-04-29 21:33:12
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wlyu1228

新虫 (小有名气)
感谢各位了,我已提出来了,零下20度半小时,离心得到了
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9楼2009-05-14 16:36:37
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