24小时热门版块排行榜    

查看: 1936  |  回复: 7
当前主题已经存档。

sdauxxx

新虫 (小有名气)

[交流] 热激转化的原理,敬请赐教

前段时间做TAIL,扩出了几个片段,要测序。用质粒载体转化大肠杆菌,步骤都有了,可不太明白,步骤中的温度啊,时间啊是怎么定的,怎么个意思,希望各位做过的多多赐教……

[ Last edited by amisking on 2009-10-21 at 08:16 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)

可以到GOOGLE上搜下,道理是很简单的。
2楼2009-04-16 15:55:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑罕

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 10-22 21:06
以CaCl2法制作的大肠杆菌感受态为例,其原理是细菌处于0℃,CaCl2的低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase(DNA酶)的羟基--钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热冲击处理,促使细胞吸收DNA复合物,在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增值。被转化的细菌中,重组子中基因得到表达,在选择性培养基平板上,可选出所需的转化子。
3楼2009-04-16 19:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasmine012

十分感谢,很详细
4楼2009-09-02 20:14:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wm9213

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
二楼说得真好!受益匪浅!
5楼2009-10-21 03:52:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 10-22 21:06
在宿主菌活化后增值的时候,要求细菌生长在对数期,就是细胞壁最薄的时候。这个时间一般是由经验得出,这里不多说,网上一堆,不行的话弄个分光光度计测一下。对于冰浴的时间也不是太有要求,大概整管细菌达到零度就好,要注意的就是热激时间和温度,那个一定要照分子克隆上面的来。我以前试过很多次,就那个90S  42℃貌似最好用,别的时间和温度
貌似都不好用
可以用QQ找我……
6楼2009-10-21 09:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdauxxx

新虫 (小有名气)

多谢五楼
7楼2009-10-22 20:27:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-24 08:18
其实很容易,我们实验老师教给我们上课的时候根本都没用水浴锅,把冰上的DNA放在手上握1分钟,也不在加培养基摇,直接涂板,也长出不少转化子。他说有时候放酒精灯上扫一下都行。那哥们可是在Nature protocol上发过两篇文章的小牛啊
8楼2009-10-24 01:33:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sdauxxx 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +11 医学老男孩 2026-08-13 29/1450 2026-08-14 00:04 by 大快人心啦
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见