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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 热激转化的原理，敬请赐教
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sdauxxx

新虫 (小有名气)

[交流] 热激转化的原理，敬请赐教

前段时间做TAIL，扩出了几个片段，要测序。用质粒载体转化大肠杆菌，步骤都有了，可不太明白，步骤中的温度啊，时间啊是怎么定的，怎么个意思，希望各位做过的多多赐教……

[ Last edited by amisking on 2009-10-21 at 08:16 ]
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1楼 2009-04-16 14:48:35
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anik

银虫 (正式写手)
可以到GOOGLE上搜下，道理是很简单的。
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2楼2009-04-16 15:55:26
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黑罕

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 10-22 21:06
以CaCl2法制作的大肠杆菌感受态为例，其原理是细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase（DNA酶）的羟基--钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增值。被转化的细菌中，重组子中基因得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。
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3楼2009-04-16 19:12:38
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jasmine012

十分感谢，很详细
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4楼2009-09-02 20:14:00
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wm9213

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
二楼说得真好！受益匪浅！
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5楼2009-10-21 03:52:35
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 10-22 21:06
在宿主菌活化后增值的时候，要求细菌生长在对数期，就是细胞壁最薄的时候。这个时间一般是由经验得出，这里不多说，网上一堆，不行的话弄个分光光度计测一下。对于冰浴的时间也不是太有要求，大概整管细菌达到零度就好，要注意的就是热激时间和温度，那个一定要照分子克隆上面的来。我以前试过很多次，就那个90S  42℃貌似最好用，别的时间和温度
貌似都不好用
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可以用QQ找我……
6楼2009-10-21 09:58:11
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sdauxxx

新虫 (小有名气)
多谢五楼
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7楼2009-10-22 20:27:41
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-24 08:18
其实很容易，我们实验老师教给我们上课的时候根本都没用水浴锅，把冰上的DNA放在手上握1分钟，也不在加培养基摇，直接涂板，也长出不少转化子。他说有时候放酒精灯上扫一下都行。那哥们可是在Nature protocol上发过两篇文章的小牛啊
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8楼2009-10-24 01:33:53
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