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sdauxxx

新虫 (小有名气)

[交流] 热激转化的原理,敬请赐教

前段时间做TAIL,扩出了几个片段,要测序。用质粒载体转化大肠杆菌,步骤都有了,可不太明白,步骤中的温度啊,时间啊是怎么定的,怎么个意思,希望各位做过的多多赐教……

[ Last edited by amisking on 2009-10-21 at 08:16 ]
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anik

银虫 (正式写手)

可以到GOOGLE上搜下,道理是很简单的。
2楼2009-04-16 15:55:26
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黑罕

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 10-22 21:06
以CaCl2法制作的大肠杆菌感受态为例,其原理是细菌处于0℃,CaCl2的低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase(DNA酶)的羟基--钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热冲击处理,促使细胞吸收DNA复合物,在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增值。被转化的细菌中,重组子中基因得到表达,在选择性培养基平板上,可选出所需的转化子。
3楼2009-04-16 19:12:38
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jasmine012

十分感谢,很详细
4楼2009-09-02 20:14:00
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wm9213

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
二楼说得真好!受益匪浅!
5楼2009-10-21 03:52:35
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 10-22 21:06
在宿主菌活化后增值的时候,要求细菌生长在对数期,就是细胞壁最薄的时候。这个时间一般是由经验得出,这里不多说,网上一堆,不行的话弄个分光光度计测一下。对于冰浴的时间也不是太有要求,大概整管细菌达到零度就好,要注意的就是热激时间和温度,那个一定要照分子克隆上面的来。我以前试过很多次,就那个90S  42℃貌似最好用,别的时间和温度
貌似都不好用
可以用QQ找我……
6楼2009-10-21 09:58:11
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sdauxxx

新虫 (小有名气)

多谢五楼
7楼2009-10-22 20:27:41
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-24 08:18
其实很容易,我们实验老师教给我们上课的时候根本都没用水浴锅,把冰上的DNA放在手上握1分钟,也不在加培养基摇,直接涂板,也长出不少转化子。他说有时候放酒精灯上扫一下都行。那哥们可是在Nature protocol上发过两篇文章的小牛啊
8楼2009-10-24 01:33:53
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