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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提不出DNA，菌液PCR也P不出
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含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] 提不出DNA，菌液PCR也P不出

要鉴定8株菌（同一属），有7株菌液PCR都能P出16 S rDNA ，但有一株P不出来也提不出来DNA（加溶解酶跟SDS），大家能有什么好办法呢？
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1楼 2009-04-16 13:14:38
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tsingtao2008

木虫 (著名写手)

地球村村民
Primer pair to amplify the LSU rDNA D1-D2 region of all metazoa and cycling profile
Universal primers designed to amplify the D1-D2 region from all metazoa (LSU-D1-2-fw1：5`-AGCGGAGGAAAAGAAACT-3`, LSU-D1-2-rev1：5`-TACTAGAAGGTTCGATTAGTC-3`) were used to identify unknown organisms, whose PCR products was unavailable for analysis using primers mentioned above. Amplification program was essentially the same as that of Sonnenberg, Nolte and Tautz (2007), and a step of 95℃ for 5 min was included to activate Taq platinum when the polymerase was used.

Sonnenberg R, Nolte AW and Tautz D. 2007.An evaluation of LSU rDNA D1-D2 sequences for their use in species identification. Frontiers in Zoology 2007, 4:6. doi:10.1186/1742-9994-4-6.
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钱要流动，人要走动
9楼2009-04-18 12:38:27
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zhaoy02007

银虫 (初入文坛)
菌液1ml，沸水煮30min～1h，离心上清做PCR模板，试一试吧。别看方法比较原始。提取细菌基因组DNA是很简单有效的。
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进化中没有失败的物种基因中没有无用的序列生物中没有长久的永恒
2楼2009-04-16 23:05:57
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含笑~

银虫 (正式写手)

回复zhaoy02007

我的操作是这样的：取菌液1.00mL,离心收集菌体，用100.00uL ddH2O重悬菌体，沸水浴15分钟，离心，取上清1.00uL做模板，没P出来，其它几个菌都P出了。难道是时间煮的不够吗？
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3楼2009-04-17 10:24:23
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaoy02007 at 2009-4-16 23:05:
菌液1ml，沸水煮30min～1h，离心上清做PCR模板，试一试吧。别看方法比较原始。提取细菌基因组DNA是很简单有效的。

煮这么长时间,DNA不会受影响吗,另外,离心的转速多大,12000rpm?那样的话浓度不就很低了吗
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4楼2009-04-17 10:55:08
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