应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提不出DNA，菌液PCR也P不出
51/1返回列表
查看: 904  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

含笑~

银虫 (正式写手)

[交流] 提不出DNA，菌液PCR也P不出

要鉴定8株菌（同一属），有7株菌液PCR都能P出16 S rDNA ，但有一株P不出来也提不出来DNA（加溶解酶跟SDS），大家能有什么好办法呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-04-16 13:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tsingtao2008

木虫 (著名写手)

地球村村民
Primer pair to amplify the LSU rDNA D1-D2 region of all metazoa and cycling profile
Universal primers designed to amplify the D1-D2 region from all metazoa (LSU-D1-2-fw1：5`-AGCGGAGGAAAAGAAACT-3`, LSU-D1-2-rev1：5`-TACTAGAAGGTTCGATTAGTC-3`) were used to identify unknown organisms, whose PCR products was unavailable for analysis using primers mentioned above. Amplification program was essentially the same as that of Sonnenberg, Nolte and Tautz (2007), and a step of 95℃ for 5 min was included to activate Taq platinum when the polymerase was used.

Sonnenberg R, Nolte AW and Tautz D. 2007.An evaluation of LSU rDNA D1-D2 sequences for their use in species identification. Frontiers in Zoology 2007, 4:6. doi:10.1186/1742-9994-4-6.
赞一下 回复此楼
钱要流动，人要走动
9楼2009-04-18 12:38:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

zhaoy02007

银虫 (初入文坛)
菌液1ml，沸水煮30min～1h，离心上清做PCR模板，试一试吧。别看方法比较原始。提取细菌基因组DNA是很简单有效的。
赞一下 回复此楼
进化中没有失败的物种基因中没有无用的序列生物中没有长久的永恒
2楼2009-04-16 23:05:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

含笑~

银虫 (正式写手)

回复zhaoy02007

我的操作是这样的：取菌液1.00mL,离心收集菌体，用100.00uL ddH2O重悬菌体，沸水浴15分钟，离心，取上清1.00uL做模板，没P出来，其它几个菌都P出了。难道是时间煮的不够吗？
赞一下 回复此楼
3楼2009-04-17 10:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaoy02007 at 2009-4-16 23:05:
菌液1ml，沸水煮30min～1h，离心上清做PCR模板，试一试吧。别看方法比较原始。提取细菌基因组DNA是很简单有效的。

煮这么长时间,DNA不会受影响吗,另外,离心的转速多大,12000rpm?那样的话浓度不就很低了吗
赞一下 回复此楼
4楼2009-04-17 10:55:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 5/250 2026-08-17 16:38 by CBFiACZS7HAK
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6GojgJvkDudM 2026-08-16 7/350 2026-08-17 16:14 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +7 wangze12014 2026-08-14 9/450 2026-08-17 14:59 by wangze12014
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 6/300 2026-08-17 14:02 by EYK67XJMj64E
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭