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cathyl_7

铜虫 (小有名气)

[交流] CO-IP问题求助

研究蛋白-蛋白相互作用时,用co-immunoprecipitation 即免疫共沉淀方法。
问题(1) 2个蛋白A与B进行相互作用的验证,用双向CO-IP。A蛋白 IP B蛋白时,结果成阳性;但反过来,用B蛋白 IP A蛋白 时,结果为阴性。这样的结果,说明A与B有没有相互作用啊,大家有没有遇到过这样的情况?

问题(2)在做Western Blotting 时,lysate检测不到,而IP可以检测到。不论自身IP还 是被IP的蛋白都出现过这种情况。且只是有时候。不清楚原因

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:17 ]
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清华大学 09 QQ群:86574655
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cathyl_7

铜虫 (小有名气)

楼上是指蛋白大小差异吗

A/B两个蛋白都差不多40,50kDa。应该不存在一个分子量太大,一个分子量太小,太小的很难把大蛋白IP下来的情况

如果不是这种差异,楼上的意思是?
清华大学 09 QQ群:86574655
6楼2009-04-16 18:09:22
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

难道是抗体有问题?有些抗体是不适合做IP只能做WB的,得仔细看看说明书
2楼2009-04-15 13:35:49
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cathyl_7

铜虫 (小有名气)

抗体应该没问题,同样的抗体,也做别的IP,有阳性结果。只是正反IP的时候,结果不一致,不知道大家有没有遇到过这种情况

以前听别人也遇到过,但都不知道怎么解决,在这求助大家啊。谢谢
清华大学 09 QQ群:86574655
3楼2009-04-15 15:45:12
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cathyl_7

铜虫 (小有名气)

顶一下,有虫友知道原因吗,不胜感激啊?
清华大学 09 QQ群:86574655
4楼2009-04-16 09:39:52
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