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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » CO-IP问题求助
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cathyl_7

铜虫 (小有名气)

[交流] CO-IP问题求助

研究蛋白-蛋白相互作用时，用co-immunoprecipitation 即免疫共沉淀方法。
问题（1） 2个蛋白A与B进行相互作用的验证，用双向CO-IP。A蛋白 IP B蛋白时，结果成阳性；但反过来，用B蛋白 IP A蛋白 时，结果为阴性。这样的结果，说明A与B有没有相互作用啊，大家有没有遇到过这样的情况？

问题（2）在做Western Blotting 时，lysate检测不到，而IP可以检测到。不论自身IP还 是被IP的蛋白都出现过这种情况。且只是有时候。不清楚原因

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:17 ]
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清华大学 09 QQ群：86574655
1楼 2009-04-15 12:50:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
难道是抗体有问题？有些抗体是不适合做IP只能做WB的，得仔细看看说明书
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2楼2009-04-15 13:35:49
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cathyl_7

铜虫 (小有名气)
抗体应该没问题，同样的抗体，也做别的IP，有阳性结果。只是正反IP的时候，结果不一致，不知道大家有没有遇到过这种情况

以前听别人也遇到过，但都不知道怎么解决，在这求助大家啊。谢谢
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清华大学 09 QQ群：86574655
3楼2009-04-15 15:45:12
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cathyl_7

铜虫 (小有名气)
顶一下，有虫友知道原因吗，不胜感激啊？
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清华大学 09 QQ群：86574655
4楼2009-04-16 09:39:52
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dukemiles

木虫 (小有名气)
两种蛋白本身的差异不知楼主是否考虑过
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''theperfectsolutionistheimperfection''
5楼2009-04-16 15:53:51
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cathyl_7

铜虫 (小有名气)
楼上是指蛋白大小差异吗

A/B两个蛋白都差不多40,50kDa。应该不存在一个分子量太大，一个分子量太小，太小的很难把大蛋白IP下来的情况

如果不是这种差异，楼上的意思是？
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清华大学 09 QQ群：86574655
6楼2009-04-16 18:09:22
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dukemiles

木虫 (小有名气)
结构和丰度呢?

CO-IP不太容易出的,方法本身没问题的话,楼主不妨多试几次
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''theperfectsolutionistheimperfection''
7楼2009-04-17 08:15:49
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cathyl_7

铜虫 (小有名气)
我做的是外源实验，全都是外转质粒。丰度应该不用考虑，蛋白表达也没什么问题

至于结构，如果A蛋白可以IP B蛋白的话，它们应该具备相互结合的结构域或条件吧

B蛋白IP A蛋白，都做了十几次了啊

所以求助大家，谢谢
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清华大学 09 QQ群：86574655
8楼2009-04-17 10:01:32
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cathyl_7

铜虫 (小有名气)
顶一下，有经验之人，提供点帮助吧，谢谢啊！
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清华大学 09 QQ群：86574655
9楼2009-04-17 22:33:36
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