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630894887

新虫 (小有名气)

[求助] 请问用脂质体转染细胞HepG2和Hela后期筛选稳转细胞具体有什么要求呢?

我打算做荧光素酶报告基因实验,正在用脂质体转染的方法,将构建好的质粒转染进HepG2和Hela细胞。

目前已确定了筛选浓度,转染24h后,加入G418筛选浓度,但是后续做稳转株不懂,搜了资料发现各种各样的方案,请问大家一般用的什么方案呢?

我的细胞现在在25cm2的培养瓶中筛选处理,已有6天,有部分细胞团存在。继续用筛选浓度培养一两个月,还存活的就可以确定么? 需要降低G418浓度做维持浓度么?

谢谢~@biostar2009@youlinglyw
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wshdhr8

铁虫 (小有名气)


drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-11-11 07:37:41
2楼2018-11-06 11:28:28
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630894887

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wshdhr8 at 2018-11-06 11:28:28
要挑单克隆

如果一直在瓶子里,每天换液,一个月之后还活着的不能算是稳转么?

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-11-06 12:59:19
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wshdhr8

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 630894887 at 2018-11-06 12:59:19
如果一直在瓶子里,每天换液,一个月之后还活着的不能算是稳转么?
...

长期做实验并不会稳定,阳性信号会逐渐丢失。

发自小木虫Android客户端
4楼2018-11-10 23:40:50
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