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moyu墨鱼

新虫 (小有名气)

[求助] 切胶纯化 已有3人参与

PCR产物凝胶成像后切胶纯化,试剂说明书上说每次处理的胶块量约300mg。但是我试了一下,在紫外灯下切出的tetG(176bp)抗性基因的条带不到50mg。实验用的1.5%凝胶,凝胶厚度大约5mm,上样5ul,条带亮度挺亮的,为什么我的基因条带这么轻?求解惑?能不能多切几条条带来进行纯化回收或者增加上样量?

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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-11-04 08:41:27
多切几条带统一一管回收
2楼2018-11-02 08:41:19
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-11-04 08:42:30
每次处理的胶块量约300mg
意思是每次最多溶解约300mg胶块,所以你只有控制在300mg以下就可以了,不管你是几个胶块
3楼2018-11-02 08:45:18
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hmouse

新虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-11-04 08:42:41
可以的。用同一体系在同一胶板上跑几条带,然后切下目的条带一起纯化就是了。一般他们是不会打架滴

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4楼2018-11-03 11:56:37
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moyu墨鱼

新虫 (小有名气)

5楼2018-11-05 16:36:14
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

不是你的基因轻,是胶块轻。5 μl上样量太少,50 μl上样量差不多,用超大孔胶。
6楼2018-11-07 16:39:55
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