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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » HIS标签的蛋白纯化问题
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雪梦727

铁虫 (初入文坛)

[求助] HIS标签的蛋白纯化问题

想咨询一个问题，我的蛋白是重做的带HIS标签的蛋白，重组质粒转染CHO细胞后，蛋白分泌在培养上清里。现在鉴定有重组蛋白，就是用Ni柱纯化后效果不好，杂蛋白太多。纯化后目的蛋白大约只占20%~将问下各位大神，有木有什么解决办法或者遇到类似的问题~
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1楼 2018-10-26 10:59:46
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blingstar

铜虫 (小有名气)
你镍柱怎么洗脱的

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为科学而献身！
2楼2018-12-05 00:19:29
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十点零

新虫 (小有名气)
★ ★
雪梦727(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-12-10 09:54:55
逐步提高咪唑含量洗脱，然后对不同洗脱液进行电泳检测

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3楼2018-12-10 01:12:10
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2010013608

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-14 20:32:49
剃度洗脱，摸好条件，杂带会少一些

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4楼2018-12-17 13:36:58
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摩卡~~

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2019-02-14 18:47:39
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一星子剪影

新虫 (正式写手)
梯度洗脱，然后用没有洗脱目的带的洗脱液洗脱杂蛋白，最后用确定只有目的带被洗脱的咪唑浓度洗脱。

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6楼2019-03-12 23:17:46
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