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HIS标签的蛋白纯化问题
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雪梦727
铁虫
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专业: 生物物理、生物化学与分子
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HIS标签的蛋白纯化问题
想咨询一个问题,我的蛋白是重做的带HIS标签的蛋白,重组质粒转染CHO细胞后,蛋白分泌在培养上清里。现在鉴定有重组蛋白,就是用Ni柱纯化后效果不好,杂蛋白太多。纯化后目的蛋白大约只占20%~将问下各位大神,有木有什么解决办法或者遇到类似的问题~
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1楼
2018-10-26 10:59:46
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blingstar
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专业: 抗体工程学
你镍柱怎么洗脱的
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为科学而献身!
2楼
2018-12-05 00:19:29
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专业: 生物化学
★ ★
雪梦727(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流
2018-12-10 09:54:55
逐步提高咪唑含量洗脱,然后对不同洗脱液进行电泳检测
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3楼
2018-12-10 01:12:10
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2010013608
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虫号: 2376940
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专业: 生物物理、生物化学与分子
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流
2019-02-14 20:32:49
剃度洗脱,摸好条件,杂带会少一些
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4楼
2018-12-17 13:36:58
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5楼
2019-02-14 18:47:39
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虫号: 14552925
注册: 2019-03-10
性别: GG
专业: 粒子物理与核物理实验方法
梯度洗脱,然后用没有洗脱目的带的洗脱液洗脱杂蛋白,最后用确定只有目的带被洗脱的咪唑浓度洗脱。
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6楼
2019-03-12 23:17:46
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