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森之缪

新虫 (初入文坛)

[求助] 枯草的质粒无法单酶切和双酶切

我构建了一个重组质粒,经由大肠杆菌提取,再导入至枯草芽孢杆菌。现在发现从枯草里面提取的重组质粒单酶切和双酶切都切不动(使用之前构建重组质粒的内切酶),但之前从大肠提取出来的重组质粒都切得十分顺利。而且这两个质粒进行相同引物PCR的时候,就发现大肠来源的重组质粒比枯草来源的重组质粒片段短一点,大概几百bp的样子。
求问有没有人知道原因的,现在PCR和酶切都无法判断枯草转化子是不是对的,好纠结。

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biosci

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质粒提取的不好,残留蛋白过多,影响酶切

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2楼2018-10-20 10:07:50
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森之缪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-10-20 10:07:50
质粒提取的不好,残留蛋白过多,影响酶切

我把从枯草提出的质粒送去测序了,发现和原质粒对不上,现在都不明白原因。

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3楼2018-10-30 19:32:14
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