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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 枯草的质粒无法单酶切和双酶切
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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森之缪

新虫 (初入文坛)

[求助] 枯草的质粒无法单酶切和双酶切

我构建了一个重组质粒，经由大肠杆菌提取，再导入至枯草芽孢杆菌。现在发现从枯草里面提取的重组质粒单酶切和双酶切都切不动（使用之前构建重组质粒的内切酶），但之前从大肠提取出来的重组质粒都切得十分顺利。而且这两个质粒进行相同引物PCR的时候，就发现大肠来源的重组质粒比枯草来源的重组质粒片段短一点，大概几百bp的样子。
求问有没有人知道原因的，现在PCR和酶切都无法判断枯草转化子是不是对的，好纠结。

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1楼 2018-10-19 14:53:04
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
质粒提取的不好，残留蛋白过多，影响酶切

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2楼2018-10-20 10:07:50
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森之缪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-10-20 10:07:50
质粒提取的不好，残留蛋白过多，影响酶切

我把从枯草提出的质粒送去测序了，发现和原质粒对不上，现在都不明白原因。

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3楼2018-10-30 19:32:14
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