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daidai0124木虫 (正式写手)
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【求助】超滤能否脱盐和浓缩一步完成啊?
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本人主要是从发酵液中提取酶(分子量55000左右),文献上一般的步骤是先用硫酸铵沉淀,然后透析,再用超滤浓缩,最后冷冻干燥,但从超滤原理上看只要选好合适的超滤膜也应该可以直接脱盐,也就是硫酸铵沉淀之后直接用超滤透析脱盐和浓缩,省去用透析袋透析的过程.这只是我个人的想法,还望高人指点下啊,这个方法是否合理啊? [ Last edited by daidai0124 on 2009-4-14 at 13:12 ] |
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wordsworth3180
木虫 (正式写手)
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3楼2009-04-11 11:11:27
HarveyWang
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超滤能否脱盐和浓缩一步完成回复
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daidai0124(金币+4,VIP+0):谢谢,讲的很具体,本人以后就是准备大规模的提取酶,也觉得硫酸铵沉沉太浪费,不知还有什么好方法不? 4-12 08:49
daidai0124(金币+4,VIP+0):谢谢,讲的很具体,本人以后就是准备大规模的提取酶,也觉得硫酸铵沉沉太浪费,不知还有什么好方法不? 4-12 08:49
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本人主要是从发酵液中提取酶,文献上一般的步骤是先用硫酸铵沉淀,然后透析,再用超滤浓缩,最后冷冻干燥, 但从超滤原理上看只要选好合适的超滤膜也应该可以直接脱盐,也就是硫酸铵沉淀之后直接用超滤透析脱盐和浓缩,省去用透析袋透析的过程.这只是我个人的想法,还望高人指点下啊,这个方法是否合理啊? 这要看你需要做多大的体积了。  (1)硫酸铵沉淀法：我的观点是，如果你1000 mL的发酵液的话，硫酸铵沉淀可以用，但是这浪费多少硫酸铵啊？！做学术研究可以，如果你的课题是计划做提取酶的工艺和中试的话，这种硫酸铵沉淀并不有太大的实用性。 （2）超滤步骤的选用要看你的酶溶液有多大的体积。 如果发酵液的酶的量并不是很浓的话，例如50 mL 10 mg/L的酶量，用这种超滤膜会损失掉大部分你的目地酶，都粘到膜上去了，很难洗下来（稀的NaOH可以）。不能轻信某品牌销售说的话，用用就知道了。如果你的浓缩液体积比较大，例如100-500 mL，酶的浓度也很高，这是可以用超滤膜的。 （3）对于小体积的脱盐透析，透析袋很好用的。这里是指10 mL-100 mL。从操作方便性上看，这个在小型试验中我最喜欢用。好简单啊。。。。 （4）透析袋透析完后，你想进一步浓缩酶的话，建议LZ用离子交换法。选择合适的挂柱缓冲液可一次性处理50-500 mL，选择一次性洗脱可浓缩到2-10 mL。 |
4楼2009-04-11 18:58:13
daidai0124
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5楼2009-04-13 19:05:16
HarveyWang
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6楼2009-04-14 10:30:16
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