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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】超滤能否脱盐和浓缩一步完成啊?
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daidai0124

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】超滤能否脱盐和浓缩一步完成啊?

本人主要是从发酵液中提取酶(分子量55000左右),文献上一般的步骤是先用硫酸铵沉淀,然后透析,再用超滤浓缩,最后冷冻干燥,但从超滤原理上看只要选好合适的超滤膜也应该可以直接脱盐,也就是硫酸铵沉淀之后直接用超滤透析脱盐和浓缩,省去用透析袋透析的过程.这只是我个人的想法,还望高人指点下啊,这个方法是否合理啊?

[ Last edited by daidai0124 on 2009-4-14 at 13:12 ]
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1楼 2009-04-11 09:42:09
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★ ★
daidai0124(金币+2,VIP+0):谢谢,能否找几篇用这种方式处理的文献啊,我一直没找到! 4-11 10:39
完全可以
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2楼2009-04-11 10:00:43
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
★
daidai0124(金币+1,VIP+0):谢谢! 4-12 08:43
只要超滤膜选的合适 就行
昨天有个millipore的技术人员就是这样说的~
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3楼2009-04-11 11:11:27
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

超滤能否脱盐和浓缩一步完成回复

★ ★ ★ ★
daidai0124(金币+4,VIP+0):谢谢,讲的很具体,本人以后就是准备大规模的提取酶,也觉得硫酸铵沉沉太浪费,不知还有什么好方法不? 4-12 08:49
本人主要是从发酵液中提取酶,文献上一般的步骤是先用硫酸铵沉淀,然后透析,再用超滤浓缩,最后冷冻干燥,
但从超滤原理上看只要选好合适的超滤膜也应该可以直接脱盐,也就是硫酸铵沉淀之后直接用超滤透析脱盐和浓缩,省去用透析袋透析的过程.这只是我个人的想法,还望高人指点下啊,这个方法是否合理啊?

这要看你需要做多大的体积了。

(1)硫酸铵沉淀法：我的观点是，如果你1000 mL的发酵液的话，硫酸铵沉淀可以用，但是这浪费多少硫酸铵啊？！做学术研究可以，如果你的课题是计划做提取酶的工艺和中试的话，这种硫酸铵沉淀并不有太大的实用性。

（2）超滤步骤的选用要看你的酶溶液有多大的体积。
如果发酵液的酶的量并不是很浓的话，例如50 mL  10 mg/L的酶量，用这种超滤膜会损失掉大部分你的目地酶，都粘到膜上去了，很难洗下来（稀的NaOH可以）。不能轻信某品牌销售说的话，用用就知道了。如果你的浓缩液体积比较大，例如100-500 mL，酶的浓度也很高，这是可以用超滤膜的。

（3）对于小体积的脱盐透析，透析袋很好用的。这里是指10 mL-100 mL。从操作方便性上看，这个在小型试验中我最喜欢用。好简单啊。。。。

（4）透析袋透析完后，你想进一步浓缩酶的话，建议LZ用离子交换法。选择合适的挂柱缓冲液可一次性处理50-500 mL，选择一次性洗脱可浓缩到2-10 mL。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-04-11 18:58:13
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daidai0124

木虫 (正式写手)
自己顶一个,解答的详细的有重奖!(金币可以再加)
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5楼2009-04-13 19:05:16
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

要详细信息

★
daidai0124(金币+1,VIP+0):呵呵,金币没问题 4-14 11:28
引用回帖:
Originally posted by daidai0124 at 2009-4-13 19:05:
自己顶一个,解答的详细的有重奖!(金币可以再加)

（1）发酵液的酶蛋白浓度大约是多少，纯度是多少？发个SDS-PAGE看看，注明上样量。
（2）硫酸铵沉淀后和透析后可上离子交换，这可以浓缩10-1000倍，还可以有纯化效果，然后再冷冻浓缩啊。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-04-14 10:30:16
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

有金币啊

哈哈哈哈，回帖就有金币拿
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
7楼2009-04-14 10:31:05
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daidai0124

木虫 (正式写手)
本人现在只是小规模的提取酶,马上要上发酵罐,需要大规模的提取酶液,不是做酶学性质,所以酶的纯度要求不高,和工业用酶的纯度差不多就可以了!希望大家推荐个适合工业化提取酶液的工艺,主要考虑成本问题.请版主帮忙在增加悬赏金币20个
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8楼2009-04-14 11:36:25
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lvgl158

金虫 (正式写手)
★
daidai0124(金币+1,VIP+0):谢谢! 4-14 13:14
起码知道 它的分子量  才能知道是否可以用同一个膜 如果小于一万可能就有点难度 可以先用少量的硫酸铵澄清 离心后 进行超滤
在超滤前 必须的保证液体 清澈

[ Last edited by lvgl158 on 2009-4-14 at 12:26 ]
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9楼2009-04-14 12:20:18
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hezhao999

木虫 (正式写手)
★
daidai0124(金币+1,VIP+0):谢谢 4-14 13:15
体积的在200ml以上用超滤仪，200ml以下可以用超滤离心管，如果不知分子量选用1000的膜完全可以了，如果知道分子量，则选择酶分子量1/5的超滤膜。
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10楼2009-04-14 12:26:23
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