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baobeiding

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助3500外源片段怎么插入到载体上?】+【有效期至2009年04月15日】,

我现在有一段3500的外源片段!想把它插入到6900的载体上!
l连接了两次都没有成功!我的3500多的外源片段是由3个小片段构成!每段1000多!6900的载体是外国人造的!找不到质粒图谱!我去年构建完这个质粒后发现质粒变小了少了4000多!找不到原因!我插入的外源片段还在!(每个小片段都能用单酶切切出来,PCR也能P出来!)所以现在想连在一起的这三段切下来连到载体上!~从新连接下!我用的质粒是穿梭质粒pBT2。
请问给位大侠有pRB373的质粒图谱么?该质粒上有一段序列来自该质粒!
谢谢~!
请大家帮我想想,我应该从哪里入手!!重新连接~!该怎么优化~!
我连接的体系是
外源片段:2ul
载体     :3ul
酶和buffer:5ul(试剂盒)
16°连接过夜!

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myplum

木虫 (小有名气)


baobeiding(金币+1,VIP+0):谢谢 问题已经解决了~! 4-15 15:15
我是个新虫,也不怎么清楚,帮忙顶一下楼主了哈哈
5楼2009-04-09 20:10:28
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zhyzx

金虫 (小有名气)


baobeiding(金币+1,VIP+0):谢谢! 4-15 15:14
查找最初的原文献应该可以找到质粒图谱吧,找到后根据酶切位点重新设计,可能效果会好一点吧。
2楼2009-04-09 11:04:33
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echocean

新虫 (小有名气)

同学,你的信息量根本就不够你做这件事的!
3楼2009-04-09 13:41:19
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baobeiding

金虫 (小有名气)

为什么?

引用回帖:
Originally posted by echocean at 2009-4-9 13:41:
同学,你的信息量根本就不够你做这件事的!

那要有多少信息量才够做?具体说说!谢谢指导
4楼2009-04-09 17:13:06
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