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静默人声412木虫 (小有名气)
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[求助]
ITSI 荧光定量
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一、我使用引物：ITS5-1737 ：GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG ITS2-2043：GCTGCGTTCTTCATCGATGC 想要使用荧光定量对土壤真菌进行定量研究，可是在克隆制作标准曲线时，PCR结果电泳出现两条带，一条在２００ｂｐ（亮），一条在300bp左右（浅）。 尝试了更改了实验程序后，还是这样，想问一下有没有做过ITSI区域荧光定量的同仁，能解一下惑。 二、在使用宝生物的PMD19-T（simple）克隆后，提取质粒跑电泳却只有不到2000bp条带（应该有３０００多ｂｐ才对），测序结果显示有插入片段，但是用插入片段的特异性引物去载体后片段大小都小了几十bp，这个质粒还能用于制作荧光定量的标准曲线吗？可以用克隆后，菌落PCR和测序验证后的PCR产物可以用于制作标准曲线吗？ |
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