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请教这对引物的设计问题
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文献中克隆该1230bp长度的基因CDS（5'端和3'端序列见截图）时设计了如下一对引物： F： 5’-TCA GCA TAT GCC CTT CTC CCG TAC-3’ R：5’-GCA GGA TCC TCG TTC AAT ATA CGG-3’ 这对引物中正向引物基本上照抄5'端开始部分序列+酶切位点（下划线部分）+保护碱基，为什么反向引物除去保护碱基+酶切位点（下划线部分）外的部分与3'端的互补序列相差这么大，一般反向引物配对部分不是用3'端的互补序列么（或适当调整部分碱基）？相差大的话能克隆出来吗？  1.png  2.png |
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2楼2018-09-22 23:56:39
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这1230bp的参考序列是cdna还是cds？可以把反向引物反向互补后在参考序列里比对下找位置。正常情侣下正反引物都应该是match的 发自小木虫IOS客户端 |
22楼2018-09-23 08:29:45
23楼2018-09-23 09:27:13
24楼2018-09-23 10:00:03
25楼2018-09-23 11:38:57
26楼2019-07-01 22:08:02
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zgjut0683楼
2018-09-23 00:12
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zqvuc0434楼
2018-09-23 00:24
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kzhk9576楼
2018-09-23 00:33
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