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hbq52

铜虫 (初入文坛)


[交流] 请教这对引物的设计问题

文献中克隆该1230bp长度的基因CDS(5'端和3'端序列见截图)时设计了如下一对引物:
F: 5’-TCA GCA TAT GCC CTT CTC CCG TAC-3’
R:5’-GCA GGA TCC TCG TTC AAT ATA CGG-3’
这对引物中正向引物基本上照抄5'端开始部分序列+酶切位点(下划线部分)+保护碱基,为什么反向引物除去保护碱基+酶切位点(下划线部分)外的部分与3'端的互补序列相差这么大,一般反向引物配对部分不是用3'端的互补序列么(或适当调整部分碱基)?相差大的话能克隆出来吗?

请教这对引物的设计问题
1.png


请教这对引物的设计问题-1
2.png
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apple53

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
pcr至少15个碱基配对哦

发自小木虫Android客户端
25楼2018-09-23 11:38:57
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dongmings5楼
2018-09-23 00:30   回复  
hbq52(金币+1): 谢谢参与
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