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mjl3680木虫 (小有名气)
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蛋白表达问题
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我是用pet30a+做表达载体,构建的质粒包括了两段要表达的基因,这两段基因前一个就是N端有ATG没有终止密码子,后一个有ATG也有终止密码子,这样构建的质粒转化到大肠杆菌,发现后面一段基因表达了,因为后一段是荧光蛋白,菌诱导后有很强的荧光,不知道是量不够还是什么原因,SDS-PAGE看不出条带,这种情况,是融合表达,还是跳过前面那段基因直接表达后面这段呢?两段外源基因都700bp左右,请知道的兄弟姐妹们指点。 做WB还得费好多事,有没有别的方法检测,电泳都看不到,用NI柱也没分离到,什么原因啊 |
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