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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 点饱和突变
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HHHH0099

银虫 (小有名气)

[求助] 点饱和突变

有没有用SOE PCR做过点饱和突变的？
1. 用SOE PCR做点饱和突变，一般设计什么样的简并引物？NDT?NNK?
比如上游引物5'→3‘是ATGCNNKATGC，下游引物是什么？
NNK,NDT用什么去对？去互补？
2. 用SOE PCR做点饱和突变，一般构建步骤往后都是什么？还用做提质粒，双酶切鉴定，PCR鉴定么？
还是直接转表达菌看表达？然后送去测序？
专业大神求指导 。
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1楼 2018-09-21 14:42:52
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白话八股

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-09-22 10:28:44
toyobo突变试剂盒，或者任意一家的无缝克隆试剂盒都行。突变位点设置在一条引物上

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最爱的那个人会出现在身边。
2楼2018-09-21 15:57:01
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HHHH0099

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 白话八股 at 2018-09-21 15:57:01
toyobo突变试剂盒，或者任意一家的无缝克隆试剂盒都行。突变位点设置在一条引物上

能稍微说的详细点么？引物不需要设计两条链么？我想问NDT的互补链上互补碱基是什么？
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3楼2018-09-25 08:55:50
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白话八股

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by HHHH0099 at 2018-09-25 08:55:50
能稍微说的详细点么？引物不需要设计两条链么？我想问NDT的互补链上互补碱基是什么？...

引物两条链，我一般把突变点设计在一条引物上

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最爱的那个人会出现在身边。
4楼2018-09-25 17:13:50
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