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求助分子克隆 已有1人参与
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| 本人正在克隆一个基因，大小1500bp，有这个基因的质粒A，但是这个质粒上的这个基因带有标签，现在我需要一个不带标签的质粒，并将它克隆到另外一个质粒B上。我先将这段基因复制出来，然后纯化，再将质粒B和pcr产物进行双酶切，由于pcr产物酶切后变化不大，因此只做了质粒酶切后电泳，基本上是酶切完全的，之后按照体系进行连接，16度连接过夜，但就是始终连接不上，长不出阳性菌，有的甚至不长菌。因为刚刚转化成功了另外一个质粒，所以，平板和感受态可以确定没有问题，但就是连接做不出来，请大神帮忙分析分析，看我到底哪里出错了，哪里应该注意的。 |
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