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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助分子克隆
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peaker哈哈

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助分子克隆 已有1人参与

本人正在克隆一个基因，大小1500bp，有这个基因的质粒A，但是这个质粒上的这个基因带有标签，现在我需要一个不带标签的质粒，并将它克隆到另外一个质粒B上。我先将这段基因复制出来，然后纯化，再将质粒B和pcr产物进行双酶切，由于pcr产物酶切后变化不大，因此只做了质粒酶切后电泳，基本上是酶切完全的，之后按照体系进行连接，16度连接过夜，但就是始终连接不上，长不出阳性菌，有的甚至不长菌。因为刚刚转化成功了另外一个质粒，所以，平板和感受态可以确定没有问题，但就是连接做不出来，请大神帮忙分析分析，看我到底哪里出错了，哪里应该注意的。
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1楼 2018-09-19 10:40:12
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peaker哈哈

新虫 (初入文坛)
啊呀、、大神们都在努力工作么？
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2楼2018-09-19 10:48:21
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-09-22 10:30:45
买个重组试剂盒做吧，不贵，几百块，就是要重新设计引物扩增而已。
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。
3楼2018-09-19 22:58:23
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mayunhui

新虫 (正式写手)
你的PCR能P出1500bp的片段，P出来的片段质量，稳定性会好么？
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书到用时方恨少
4楼2018-09-21 10:33:28
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zw破风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR直接infusion得了，干嘛还要酶切PCR产物
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5楼2018-09-21 13:09:55
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