24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3495  |  回复: 9

rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] WB没有条带

楼主在pcDNA3.1上插入了一段外源序列,瞬转48小时收,HA标签,没有目的条带。
1. 阳参正常,排除操作和抗体
2. 序列正确,测序了,ATG啥的都没问题
3. actin正常
4. 阳参和实验组都是外源蛋白,而且差不多,阳参比如是A,实验组就是A后面又加了一段序列而已,形成B。二者的载体骨架都一样的。都是HA标签。

请大家帮忙分析一下,是咋回事哈??是B的转染效率低吗?还是别的原因??谢谢!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

美亿美生物

捐助贵宾 (职业作家)

技术服务-实验代做


2楼2018-09-17 12:04:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

A后面有没有带终止密码子,带了那就是B没表达了。

发自小木虫Android客户端
3楼2018-09-17 13:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-09-17 13:18:32
A后面有没有带终止密码子,带了那就是B没表达了。

a后面的密码子去掉了呀,序列反复确认了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2018-09-17 14:09:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-09-17 13:18:32
A后面有没有带终止密码子,带了那就是B没表达了。

而且如果是因为这个原因的话,至少也会检测出a吧,不会啥也没有的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2018-09-17 14:16:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rohdy

新虫 (著名写手)

分子量大吗?如果太大可能存在转染效率低的问题

发自小木虫Android客户端
6楼2018-09-17 14:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by rohdy at 2018-09-17 14:19:40
分子量大吗?如果太大可能存在转染效率低的问题

95kda

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2018-09-17 14:26:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

95KD不算大,确认加入B没有造成移码突变

发自小木虫Android客户端
8楼2018-09-17 15:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-09-17 15:24:02
95KD不算大,确认加入B没有造成移码突变

确定没有,我拿质粒的测序结果直接用软件进行氨基酸翻译,一切都很正常的。我真是要吐血了。
9楼2018-09-25 08:54:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxhhyb

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by rainontime at 2018-09-25 08:54:14
确定没有,我拿质粒的测序结果直接用软件进行氨基酸翻译,一切都很正常的。我真是要吐血了。...

您好
我想问下您这个问题最后解决了吗
10楼2018-11-13 08:35:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rainontime 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 找博士生导师 +3 小代想上岸 2026-05-15 4/200 2026-05-17 09:20 by YuY66
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 v9tggjlwd0 2026-05-15 4/200 2026-05-17 08:11 by 11n4dfd8yn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 v9tggjlwd0 2026-05-15 4/200 2026-05-17 08:06 by 11n4dfd8yn
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 xx7gd5zq4e 2026-05-15 7/350 2026-05-17 07:58 by 11n4dfd8yn
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 l7k6xnh0yc 2026-05-14 8/400 2026-05-17 07:26 by 11n4dfd8yn
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k37jurhrau 2026-05-16 3/150 2026-05-17 01:25 by ue3ir18jc3
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ky2p12rrjj 2026-05-15 5/250 2026-05-17 01:10 by ue3ir18jc3
[基金申请] 精华III评审感受-评审感受-评审感受 +16 ferrarichen 2026-05-11 20/1000 2026-05-17 01:10 by 南开小綦
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 x0mp7owy2b 2026-05-15 4/200 2026-05-17 00:30 by ue3ir18jc3
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 v9tggjlwd0 2026-05-15 4/200 2026-05-17 00:15 by ue3ir18jc3
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 xx7gd5zq4e 2026-05-15 5/250 2026-05-16 23:57 by ue3ir18jc3
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 l7k6xnh0yc 2026-05-14 4/200 2026-05-16 23:10 by ue3ir18jc3
[考博] 现在不知道怎么办,感觉很痛苦 +5 qweww 2026-05-11 6/300 2026-05-16 19:57 by Equinoxhua
[有机交流] 求助2,4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 6/300 2026-05-16 19:46 by Equinoxhua
[有机交流] 求有机合成大神指点三硫酸乙烯酯(CAS:2793408-99-6)的合成路线 30+3 Leekmid 2026-05-13 10/500 2026-05-16 16:37 by czyzsu
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +5 小王求读研 2026-05-15 6/300 2026-05-16 10:44 by a4742549
[考博] 西南大学考核制博士 +4 lijunjie84 2026-05-11 7/350 2026-05-15 23:20 by 同仁堂教主
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[基金申请] 青C资助名额大幅增加! +11 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 15/750 2026-05-15 14:36 by ambravo
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
信息提示
请填处理意见