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rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] WB没有条带

楼主在pcDNA3.1上插入了一段外源序列,瞬转48小时收,HA标签,没有目的条带。
1. 阳参正常,排除操作和抗体
2. 序列正确,测序了,ATG啥的都没问题
3. actin正常
4. 阳参和实验组都是外源蛋白,而且差不多,阳参比如是A,实验组就是A后面又加了一段序列而已,形成B。二者的载体骨架都一样的。都是HA标签。

请大家帮忙分析一下,是咋回事哈??是B的转染效率低吗?还是别的原因??谢谢!!
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美亿美生物

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技术服务-实验代做


2楼2018-09-17 12:04:57
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

A后面有没有带终止密码子,带了那就是B没表达了。

发自小木虫Android客户端
3楼2018-09-17 13:18:32
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-09-17 13:18:32
A后面有没有带终止密码子,带了那就是B没表达了。

a后面的密码子去掉了呀,序列反复确认了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2018-09-17 14:09:05
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-09-17 13:18:32
A后面有没有带终止密码子,带了那就是B没表达了。

而且如果是因为这个原因的话,至少也会检测出a吧,不会啥也没有的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2018-09-17 14:16:27
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rohdy

新虫 (著名写手)

分子量大吗?如果太大可能存在转染效率低的问题

发自小木虫Android客户端
6楼2018-09-17 14:19:40
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by rohdy at 2018-09-17 14:19:40
分子量大吗?如果太大可能存在转染效率低的问题

95kda

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2018-09-17 14:26:56
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

95KD不算大,确认加入B没有造成移码突变

发自小木虫Android客户端
8楼2018-09-17 15:24:02
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-09-17 15:24:02
95KD不算大,确认加入B没有造成移码突变

确定没有,我拿质粒的测序结果直接用软件进行氨基酸翻译,一切都很正常的。我真是要吐血了。
9楼2018-09-25 08:54:14
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zxhhyb

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by rainontime at 2018-09-25 08:54:14
确定没有,我拿质粒的测序结果直接用软件进行氨基酸翻译,一切都很正常的。我真是要吐血了。...

您好
我想问下您这个问题最后解决了吗
10楼2018-11-13 08:35:07
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