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嘟嘟熊levi

金虫 (小有名气)

[求助] 反相HPLC分离天然多肽已有3人参与

各位老师,最近实验从天然中药材中分离小分子多肽。
    粉碎药材后,PBS浸泡,离心取上清,3000Da透析袋透析,收集小分子多肽。分子排阻色谱分离,收集洗脱峰,进行HPLC分离鉴定。
    采用梯度洗脱,A:水;B:含有0.1%TFA的乙腈。0 min,A:99%,B:1%;25 min,A:95%,B:5%;32 min;A:85%,B:15%。
    问题是不加TFA没有多肽峰,加了0.1%TFA,基线不稳。整个实验中HPLC的重复性很差。请问各位老师,有什么好方法吗?不胜感激。
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我凝望天涯,寻觅我的诗句
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嘟嘟熊levi

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 天涯不归路 at 2018-09-13 11:54:51
你走下空白看看基线还飘不飘,看看飘是你样品引起的还是本身就会飘?
之后你要研究你要分离的多肽的性质,选择的洗脱液是不是合适,是不是可以换成其它,另外可不可以换换凝胶颗粒去分离

在220nm下,检测基线就是逐渐上移的。在280nm下,基线就平稳。只是多肽要求是220nm检测,用酶标仪测试也是,220nm的峰很多,280nm要少一些。
我凝望天涯,寻觅我的诗句
6楼2018-09-13 14:35:56
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gwmgyp

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搬砖将

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
波长是不是接近末端的?

发自小木虫Android客户端
gwmgyp
2楼2018-09-13 00:13:25
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嘟嘟熊levi

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gwmgyp at 2018-09-13 00:13:25
波长是不是接近末端的?

就是梯度洗脱为什么基线是飘得。乙腈的用量增多,基线就慢慢上移。这个有没有办法解决啊?谢谢。
我凝望天涯,寻觅我的诗句
4楼2018-09-13 11:24:50
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天涯不归路

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你走下空白看看基线还飘不飘,看看飘是你样品引起的还是本身就会飘?
之后你要研究你要分离的多肽的性质,选择的洗脱液是不是合适,是不是可以换成其它,另外可不可以换换凝胶颗粒去分离
为了明天而努力
5楼2018-09-13 11:54:51
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