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萌萌君612

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2楼2018-09-11 14:50:53
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drwhoknowss

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没有遇到过,不过sanger测序有时会有一段序列质量不好,特别是GCrich的地方。还有就是你验证一下在放入20bp前没问题?
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
3楼2018-09-12 10:27:21
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drwhoknowss

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2楼: Originally posted by pf790352975 at 2018-09-11 08:50:53
楼主用的哪款crispr敲除载体呢  ,我目前用PX458  转染293T 转染效率不高,  GFP亮度也不强 不知道咋回事  ? 转染PEGFP效率90多 荧光也很强

PX458 GFP亮度不强是正常现象,2A的原因,亮度不够不代表效率不好。你FACS一下,有时发现效率挺高,比如70%
不过更推荐puro那一款
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-09-12 10:29:21
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萌萌君612

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5楼2018-09-12 14:10:57
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萌萌君612

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6楼2018-09-12 19:22:44
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drwhoknowss

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6楼: Originally posted by 萌萌君612 at 2018-09-12 13:22:44
你好,想再问一下,请公司测通后得到的第二段序列和cas9序列后半段一致(纠正了第一次测序的错配),且和第一次测序有部分重叠,是否可以认为质粒包含有正确的cas9序列呢?...

感觉没问题,应该是正确的。
但我没有亲眼看到峰图,所以只能言尽于此。
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
7楼2018-09-13 02:35:15
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