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暖心calmyz

银虫 (正式写手)

[求助] pet28a双酶切已有6人参与

我的一个目的片段连载pet28a上,现在想切下来连在别的载体上,但是用NEB的NdeI和HindIII双酶切发现条带很淡,抱着试一试的心态做了酶连,但是不长点,想问一下可否用快切酶酶切回收或者大家有什么别的方法~
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匿名

用户注销 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
2楼2018-09-10 10:44:26
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maye1951

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:40:42
多切一点,回收的时候少加一点水,提高浓度,还可以设计引物扩下来连到另外的载体上
4楼2018-09-11 11:09:12
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暖心calmyz

银虫 (正式写手)

13楼2018-09-19 23:06:33
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普通回帖

ghst110

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
渊博震天: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-09-11 10:53:52
现在构建载体,直接Gibson Assembly的方法,双酶切已经是落后的技术了
*才随遇长,识以穷精*
3楼2018-09-11 10:51:15
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:41:01
同意四楼的 多切一点 不热你的目的片段浓度很低本身就难连了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
修身、齐家、治国、平天下
5楼2018-09-11 20:30:49
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:41:14
既然是载体双切,你可以让载体的浓度高一点,然后多切几管,一定注意载体量要在酶切效率内
生活活生生累死
6楼2018-09-12 09:43:15
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:41:29
个人建议不用这样酶切,还是以你的那个载体为模板,重新PCR扩增产物进行酶切连接吧,而且可以用同源重组酶进行载体构建,就避开了酶切位点导致的问题,效率更好,时间更短

发自小木虫Android客户端
7楼2018-09-18 02:55:17
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borrysa

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:41:41
NdeI 很难切, 你试试切16h,切3ug试试。
8楼2018-09-19 05:46:28
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暖心calmyz

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by borrysa at 2018-09-19 05:46:28
NdeI 很难切, 你试试切16h,切3ug试试。

切了一晚 把质粒都切丢了

发自小木虫IOS客户端
9楼2018-09-19 22:33:25
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borrysa

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 暖心calmyz at 2018-09-19 22:33:25
切了一晚 把质粒都切丢了
...

真的假的?你用的是什么公司的酶?

发自小木虫IOS客户端
10楼2018-09-19 23:03:49
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