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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pet28a双酶切
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暖心calmyz

银虫 (正式写手)

[求助] pet28a双酶切 已有6人参与

我的一个目的片段连载pet28a上，现在想切下来连在别的载体上，但是用NEB的NdeI和HindIII双酶切发现条带很淡，抱着试一试的心态做了酶连，但是不长点，想问一下可否用快切酶酶切回收或者大家有什么别的方法~
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1楼 2018-09-10 10:18:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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2楼2018-09-10 10:44:26
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maye1951

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:40:42
多切一点，回收的时候少加一点水，提高浓度，还可以设计引物扩下来连到另外的载体上
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4楼2018-09-11 11:09:12
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暖心calmyz

银虫 (正式写手)
我用了快切酶解决了

发自小木虫IOS客户端
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13楼2018-09-19 23:06:33
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普通回帖

ghst110

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-09-11 10:53:52
现在构建载体，直接Gibson Assembly的方法，双酶切已经是落后的技术了
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*才随遇长，识以穷精*
3楼2018-09-11 10:51:15
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:41:01
同意四楼的 多切一点 不热你的目的片段浓度很低本身就难连了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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修身、齐家、治国、平天下
5楼2018-09-11 20:30:49
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:41:14
既然是载体双切，你可以让载体的浓度高一点，然后多切几管，一定注意载体量要在酶切效率内
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生活活生生累死
6楼2018-09-12 09:43:15
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:41:29
个人建议不用这样酶切，还是以你的那个载体为模板，重新PCR扩增产物进行酶切连接吧，而且可以用同源重组酶进行载体构建，就避开了酶切位点导致的问题，效率更好，时间更短

发自小木虫Android客户端
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7楼2018-09-18 02:55:17
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borrysa

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-02 08:41:41
NdeI 很难切， 你试试切16h,切3ug试试。
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8楼2018-09-19 05:46:28
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暖心calmyz

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by borrysa at 2018-09-19 05:46:28
NdeI 很难切， 你试试切16h,切3ug试试。

切了一晚 把质粒都切丢了

发自小木虫IOS客户端
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9楼2018-09-19 22:33:25
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borrysa

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 暖心calmyz at 2018-09-19 22:33:25
切了一晚 把质粒都切丢了
...

真的假的？你用的是什么公司的酶？

发自小木虫IOS客户端
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10楼2018-09-19 23:03:49
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