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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 农杆菌转化问题
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du20131580

金虫 (正式写手)

[求助] 农杆菌转化问题 已有4人参与

如题，最近一周都在做农杆菌转化，用的是GV3101感受态细胞，转的是pGreen0800–LUC载体带目的基因。抗性利福平和卡那，培养基50ml每次各加20-50mg的量，封口膜封起放28℃培养48小时，大多数一直不长点，要么就是培养皿边沿长霉菌，完了菌上还有白色的小虫子，重复了至少三次，转化的空载也不长，但是实验室其他人有长得正常的板子，培养基，抗生素也换了新的，还是不长菌，这个可能是什么原因哦，要怎么改善，求教大神解惑(?﹏?)

@飞约疯人院 @biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-09-09 20:06:11
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
du20131580(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-16 10:29:07
我们只能根据只言片语判断，觉得最好的办法是，你跟着你实验室有成功经验的人，两人同时做一遍。
这样更有利于你问题的解决和实验技术的提高
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2018-09-09 23:01:18
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心安洲

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
du20131580(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-16 10:29:18
要不要试试液体lb培养基，我也是摇过gv3101  lb试管里五毫升加抗生素放摇床  别用固体培养基，抗生素配成液体一次50u
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3楼2018-10-16 09:09:17
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wx1308897716

木虫 (小有名气)

神虫

【答案】应助回帖

菌株应该没问题，因为实验室别人也用了，那是否是质粒的问题，质粒可以再送去测下序，看看是不是你所说的质粒有问题
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4楼2018-10-16 12:12:16
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zhz0809

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

pGreen0800–LUC建议使用带pSoup质粒的农杆菌进行复制，
如GV3101(pSoup)
在GV3101菌株中转入help质粒：pSoup，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制
GV3101(pSoup-p19)
在GV3101菌株中转入help质粒：pSoup-p19，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制
GV3101(pJIC SA_Rep)
含辅助质粒：pJIC SA_Rep，可帮助pgR106，pgR107，pGreen，pGs2系列质粒在农杆菌中复制
EHA105(pSoup)
在EHA105菌株中转入help质粒：pSoup，可帮助pGreen，62SK，pGs2系列质粒在农杆菌中复制
AGL1(pSoup)
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5楼2018-10-30 13:14:23
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