应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Takara in-fusion kit 连接后，测序序列总对不上，求大神指点！
51/1返回列表
查看: 2044  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cheng0302

新虫 (初入文坛)

[求助] Takara in-fusion kit 连接后，测序序列总对不上，求大神指点！ 已有2人参与

通过PCR获得直线型质粒与目的基因
使用takara in-fusion cloning kit
将三个目的基因分别与直线型表达载体通过同源重组连接
连接后，提取质粒测序
测序结果跟原始序列总是对不上
总是对不上
总是对不上
目前，其中两个目的基因已成功连接上并测序正确，
但是，还有一个，我都测了30个了，都不正确
在这样下去，如何交代
求大神指点
求大神指点
求大神指点
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-09-03 09:33:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

macgray11

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 金币+5, 鼓励回帖交流 2018-09-04 07:33:45
本帖内容被屏蔽
2楼2018-09-03 10:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接前，对那个没有连上的基因的PCR产物先做个测序，看看序列对不对；如果把PCR产生的线性化的质粒骨架也去测序一下就更好。
两者无误的话再做连接，可靠性高点。

如果实在不行，重新设计一下引物好了。以前类似的实验也是连接不好，重新换一下引物就搞定了。
赞一下 回复此楼
3楼2018-09-05 01:26:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
如果你做的三个基因是平行实验，那么基本可以排除载体和连接体系方面的问题，可以从目的基因着手：
可从两个方向考虑：
1. 目的基因pcr产物，有电泳过么？条带单一么？大小正确么？模板有确认过么？
2. 测序结果，错在哪儿？是长度不对？片段丢失？突变多？
赞一下 回复此楼
4楼2018-09-05 16:07:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

毓秀清心

新虫 (初入文坛)
我也遇到了同样的情况，您解决了吗？
赞一下 回复此楼
5楼2022-06-21 19:57:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cheng0302 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +7 关忆北. 2026-04-11 7/350 2026-04-11 23:48 by baobaoye
[硕博家园] 有没有学校材料专业收跨调(一志愿085410) +6 momo(上岸版) 2026-04-06 9/450 2026-04-11 22:38 by wj165256
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 0854调剂 +11 长弓傲 2026-04-09 12/600 2026-04-11 11:16 by zhq0425
[考研] 295分求调剂 +9 ?要上岸? 2026-04-10 9/450 2026-04-11 10:48 by qingpingzhu
[考研] 283求调剂，工科！ +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸，感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 中科院总分315求调剂 +8 lallalh 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:30 by dick_runner
[考博] 博士自荐 +7 可可小胖 2026-04-08 7/350 2026-04-10 08:28 by kimhero
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 085600材料与化工专硕329 求调剂 +24 额cc 2026-04-06 25/1250 2026-04-09 16:01 by wp06
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +8 bradoner 2026-04-08 9/450 2026-04-09 13:43 by only周
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 计算机408｜在校多次国家级竞赛获奖｜申请调剂 +4 东山大白鹅 2026-04-05 4/200 2026-04-08 00:18 by chongya
[考研] 22408 一志愿双一流人工智能300分 四六级，数据分析国奖 +4 zzfeng123 2026-04-06 6/300 2026-04-07 21:02 by zzfeng123
[考研] 085100建筑学 寻求跨专业调剂 一志愿南大294分 校级省级国家级奖项若干 踏实肯干 +3 1021075758 2026-04-06 4/200 2026-04-07 09:23 by 蓝云思雨
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +11 zyx上岸！ 2026-04-05 11/550 2026-04-05 22:13 by dongzh2009
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭