应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Takara in-fusion kit 连接后，测序序列总对不上，求大神指点！
51/1返回列表
查看: 2148  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cheng0302

新虫 (初入文坛)

[求助] Takara in-fusion kit 连接后，测序序列总对不上，求大神指点！ 已有2人参与

通过PCR获得直线型质粒与目的基因
使用takara in-fusion cloning kit
将三个目的基因分别与直线型表达载体通过同源重组连接
连接后，提取质粒测序
测序结果跟原始序列总是对不上
总是对不上
总是对不上
目前，其中两个目的基因已成功连接上并测序正确，
但是，还有一个，我都测了30个了，都不正确
在这样下去，如何交代
求大神指点
求大神指点
求大神指点
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-09-03 09:33:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

macgray11

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 金币+5, 鼓励回帖交流 2018-09-04 07:33:45
本帖内容被屏蔽
2楼2018-09-03 10:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接前，对那个没有连上的基因的PCR产物先做个测序，看看序列对不对；如果把PCR产生的线性化的质粒骨架也去测序一下就更好。
两者无误的话再做连接，可靠性高点。

如果实在不行，重新设计一下引物好了。以前类似的实验也是连接不好，重新换一下引物就搞定了。
赞一下 回复此楼
3楼2018-09-05 01:26:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
如果你做的三个基因是平行实验，那么基本可以排除载体和连接体系方面的问题，可以从目的基因着手：
可从两个方向考虑：
1. 目的基因pcr产物，有电泳过么？条带单一么？大小正确么？模板有确认过么？
2. 测序结果，错在哪儿？是长度不对？片段丢失？突变多？
赞一下 回复此楼
4楼2018-09-05 16:07:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

毓秀清心

新虫 (初入文坛)
我也遇到了同样的情况，您解决了吗？
赞一下 回复此楼
5楼2022-06-21 19:57:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cheng0302 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:33 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:49 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:14 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 00:53 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:41 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭