应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大家啊，Overlap pcr连接不上
51/1返回列表
查看: 5590  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yuevis

铜虫 (小有名气)
已领完
求助大家啊，Overlap pcr连接不上
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

如下

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2018-08-27 12:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmcsxq0606

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by yuevis at 2018-08-29 08:21:46
如果片段GC富集，有什么方法可以改进吗
...

看你的描述，你的酶适合GC富集扩增，排除模板引物降解试剂污染，考虑下模板量不要加多 退火温度60 62

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
12楼2018-08-29 08:57:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

yuevis

铜虫 (小有名气)
我做四个片段连在一起，先把中间两个overlap连上了，接近1000bp，剩下两个片段都接近500bp，这三个片段分别pcr都能扩增出来，但是overlap怎么都连不上，我用的是phanta酶，扩增总是从在很大的条带（大于2000bp）处开始弥散涂带，我用taq酶做overlap的话，在1000处有个弱条带，剩下也是弥散涂带。三个片段重叠区有30bp，Tm68度左右，68度试过，从68度往下降落也试过，也试过两步分开先不加引物，之后再加，以及开始就加引物的方法，都没有效果。之前怀疑是不是退火温度的问题导致没连上，可是几个温度都试了。求助各位给点意见。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2018-08-27 12:50:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuevis

铜虫 (小有名气)
求求各位，给点意见啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-08-27 12:57:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tc148

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试试俩俩overlap

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2018-08-27 14:45:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
zxthx6楼
2018-08-27 12:51   回复  
yuevis(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
hdchina20105楼
2018-08-27 12:50   回复  
yuevis(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
andrewhf4楼
2018-08-27 12:50   回复  
yuevis(金币+4): 谢谢参与
已获得4个金币 发自小木虫Android客户端
坏山药2楼
2018-08-27 12:50   回复  
yuevis(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫Android客户端
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +5 pnpwoqbg8f 2026-02-16 5/250 2026-02-18 18:25 by 7pdbc5bdo2
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 18:12 by 7pdbc5bdo2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 18:10 by 7pdbc5bdo2
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 17:57 by 7pdbc5bdo2
[基金申请] 情人节自我反思：在爱情中有过遗憾吗？ +5 瞬息宇宙 2026-02-15 6/300 2026-02-18 12:51 by 月下雪林
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 11:09 by lqtl9djx19
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:54 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:39 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:53 by lqtl9djx19
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:38 by lqtl9djx19
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 07:55 by lotyj5cz79
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:40 by lotyj5cz79
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:38 by lotyj5cz79
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:23 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 00:40 by tk2gfblvuz
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-17 23:40 by tk2gfblvuz
[基金申请] 基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书 +3 successhe 2026-02-16 4/200 2026-02-17 20:56 by successhe
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错，点赞！ +5 瞬息宇宙 2026-02-16 6/300 2026-02-17 12:49 by jymy19840415
[基金申请] 过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链 +3 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-16 14:23 by aspect3000
[硕博家园] 江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后 +3 cleverlyy 2026-02-12 3/150 2026-02-12 21:02 by qsdf1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭