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求教各位大神，黑色素肿瘤原代细胞培养用什么方法比较好？？
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最近在做肿瘤细胞原代培养，想从黑色素肿瘤小鼠模型中，分离出肿瘤细胞进行培养。。用酶消化 和直接切碎肿瘤组织培养，都不太顺利。。请问各位大神，哪个步骤错了？ 有没有更好的方式来得到细胞。 1： 酶消化， 先把肿瘤组织取下后，分离肿瘤组织，并切成1立方毫米左右的小块，然后加入collagenase I + 30mg/ml DNase 在37度浮箱里消化1个小时。 然后加入有血清的培养基中止消化，用200目的滤网过滤， 离心（1000r/5min），弃上清，用PBS洗一次后，在离心，然后加入 1640培养基+10%血清+2% PBS，放入培养箱培养。 2: 直接组织块培养 把肿瘤组织取下后，分离肿瘤细胞，切成1立方毫米左右的小块，分散的放入 有1640培养基+10%血清+2% PBS的培养瓶中，放入培养箱中培养。 第一种方式，有得时候能得到肿瘤细胞，但是过几天，肿瘤细胞就不长了。 或者是直接污染掉了，第二种方式，得到细胞的数量也不太顺利。。 请问各位大神，有什么诀窍吗？或者你们用的什么方式来培养原代细胞呢？ 先谢谢啦 |
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