24小时热门版块排行榜    

查看: 1894  |  回复: 9
【悬赏金币】回答本帖问题,作者张文将将赠送您 100 个金币

张文将

新虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶基因鉴定杂带求助

本人最近在通过鼠尾鉴定来鉴定小鼠基因类型,用的是碱裂解法(AB液)来提取,引物有野生的,突变的和共有的三种,目的基因是200和661bp,用的TBE缓冲液,2%的胶,150伏
的电压电泳30分钟,可是不知何种原因在100到200abp之间有很多杂带,困扰多日,实属痛苦,请教各位兄弟姐妹指点迷津,麻烦了!

琼脂糖凝胶基因鉴定杂带求助


发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marc-Zhong

银虫 (初入文坛)

是不是引物有非特异情况?
2楼2018-08-15 16:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张文将

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Marc-Zhong at 2018-08-15 16:33:10
是不是引物有非特异情况?

不知道什么原因,我是第一次做,前几天后面的杂带还没有这么明显,这两天的特别明显

发自小木虫Android客户端
3楼2018-08-15 16:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

提取小仙

新虫 (初入文坛)

引物多大?原因1.引物过量;2:引物自连;

发自小木虫IOS客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2018-08-15 18:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张文将

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 提取小仙 at 2018-08-15 18:13:21
引物多大?原因1.引物过量;2:引物自连;

您好,我做的20微升的体系,引物总共两个,共一1微升

发自小木虫Android客户端
5楼2018-08-15 19:53:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张文将

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 提取小仙 at 2018-08-15 18:13:21
引物多大?原因1.引物过量;2:引物自连;

您好,不好意思,刚才回复错了,引物共3种,共有的,突变的,野生的,引物混合物共1微升,我也认为引物浓度过高,随后把引物混合物的含量减少为0.5微升,后面的杂带就消失了,我想确定一下这种调整是否可行,谢谢

发自小木虫Android客户端
6楼2018-08-15 19:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marc-Zhong

银虫 (初入文坛)

引物一般终浓度大概0.2-0.5uM。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2018-08-17 08:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张文将

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by Marc-Zhong at 2018-08-17 08:53:33
引物一般终浓度大概0.2-0.5uM。

好的,谢谢您!

发自小木虫Android客户端
8楼2018-08-17 12:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

提取小仙

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 张文将 at 2018-08-15 19:56:19
您好,不好意思,刚才回复错了,引物共3种,共有的,突变的,野生的,引物混合物共1微升,我也认为引物浓度过高,随后把引物混合物的含量减少为0.5微升,后面的杂带就消失了,我想确定一下这种调整是否可行,谢谢
...

我觉得降低引物浓度,是可以的。

发自小木虫IOS客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2018-08-21 12:49:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张文将

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 提取小仙 at 2018-08-21 12:49:42
我觉得降低引物浓度,是可以的。
...

你好,问题已经解决了,提高了退火温度减少了循环次数,后面的非特异性条带就消失的无影无踪了,谢谢了!

发自小木虫Android客户端
10楼2018-08-21 16:29:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张文将 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 信息三处送审了吗? +3 957083516 2024-05-12 3/150 2024-05-18 23:29 by 临川树荫
[教师之家] 优秀毕业论文 指导教师,普通老师有希望吗? +4 河西夜郎 2024-05-17 5/250 2024-05-18 22:41 by lide966
[考博] 考博跨专业可以跨多远 +4 竹外。。。 2024-05-18 5/250 2024-05-18 21:58 by wrgeng
[教师之家] 谁要做个人网站,可以交流啊! +11 hjc404 2024-05-14 32/1600 2024-05-18 19:23 by hjc404
[考博] 有博导缺学生吗,我可以当牛做马 +34 刘秋彤 2024-05-13 58/2900 2024-05-18 18:30 by 铁首星空
[找工作] 浙江的高校现在门槛都这么高吗 +9 dadqweq_qw 2024-05-16 9/450 2024-05-18 17:22 by shl2112501
[基金申请] 申请基金代表性成果 +11 lancet0903 2024-05-17 11/550 2024-05-18 13:37 by pinyuan33
[论文投稿] 推荐转投( transfer pending)是否有用? 50+3 lily5289 2024-05-17 6/300 2024-05-18 13:06 by lily5289
[硕博家园] 蹲一个男朋友 +17 伊伊莎贝拉 2024-05-17 26/1300 2024-05-18 12:33 by 疯狂的利剑
[教师之家] 白天不懂夜的黑,90后青椒与60后老板 +3 zylfront 2024-05-18 4/200 2024-05-18 10:12 by zylfront
[教师之家] 博士去高校就是为了有寒暑假吗? +16 wenwen0825 2024-05-16 22/1100 2024-05-18 09:57 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 这个模块怎么成了烧香拜佛的地方了 +5 shrz98 2024-05-18 5/250 2024-05-18 09:50 by 鱼翔浅底1
[留学DIY] 求助:医生想润 +7 safrina 2024-05-15 7/350 2024-05-17 18:50 by 卡皮吧啦123
[基金申请] 怎么成为NSFC评审专家? +12 phamacy 2024-05-12 13/650 2024-05-17 15:40 by oooooo?o
[电化学] 锂离子电池石墨负极用 1M LiPF6 in DEC:EC=1:1 Vol% 可以吗? 50+3 fffhhhhh 2024-05-15 8/400 2024-05-17 14:57 by 多点关心多点i
[基金申请] 12个本子最多让给1a2b +16 地球e村长 2024-05-13 19/950 2024-05-16 17:48 by sars518
[分析] 液相色谱基线上移 5+3 江上鸢飞 2024-05-13 3/150 2024-05-16 11:49 by gwmgyp
[硕博家园] 求助,请问我是否该转专业 +8 ygcbl 2024-05-12 10/500 2024-05-16 09:18 by 清晨和风一起
[有机交流] 爬大板 +4 abcde! 2024-05-12 11/550 2024-05-16 08:33 by 笑看人生1993
[论文投稿] 第一次投SCI,一审给了Revise +5 慎独的小花卷 2024-05-13 12/600 2024-05-14 20:58 by 慎独的小花卷
信息提示
请填处理意见