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张文将

新虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶基因鉴定杂带求助

本人最近在通过鼠尾鉴定来鉴定小鼠基因类型,用的是碱裂解法(AB液)来提取,引物有野生的,突变的和共有的三种,目的基因是200和661bp,用的TBE缓冲液,2%的胶,150伏
的电压电泳30分钟,可是不知何种原因在100到200abp之间有很多杂带,困扰多日,实属痛苦,请教各位兄弟姐妹指点迷津,麻烦了!

琼脂糖凝胶基因鉴定杂带求助


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张文将

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Marc-Zhong at 2018-08-15 16:33:10
是不是引物有非特异情况?

不知道什么原因,我是第一次做,前几天后面的杂带还没有这么明显,这两天的特别明显

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3楼2018-08-15 16:57:53
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张文将

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 提取小仙 at 2018-08-15 18:13:21
引物多大?原因1.引物过量;2:引物自连;

您好,我做的20微升的体系,引物总共两个,共一1微升

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5楼2018-08-15 19:53:36
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张文将

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 提取小仙 at 2018-08-15 18:13:21
引物多大?原因1.引物过量;2:引物自连;

您好,不好意思,刚才回复错了,引物共3种,共有的,突变的,野生的,引物混合物共1微升,我也认为引物浓度过高,随后把引物混合物的含量减少为0.5微升,后面的杂带就消失了,我想确定一下这种调整是否可行,谢谢

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6楼2018-08-15 19:56:19
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张文将

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by Marc-Zhong at 2018-08-17 08:53:33
引物一般终浓度大概0.2-0.5uM。

好的,谢谢您!

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8楼2018-08-17 12:02:09
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张文将

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 提取小仙 at 2018-08-21 12:49:42
我觉得降低引物浓度,是可以的。
...

你好,问题已经解决了,提高了退火温度减少了循环次数,后面的非特异性条带就消失的无影无踪了,谢谢了!

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10楼2018-08-21 16:29:55
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