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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何使用小分子标签在不融合多肽片段的情况下标记蛋白质分子
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厚德求是

木虫 (著名写手)

[交流] 如何使用小分子标签在不融合多肽片段的情况下标记蛋白质分子

想和虫友们交流一下蛋白质标记的问题。蛋白质标记嘛，顾名思义，通过给蛋白质加一个标签来显示目标蛋白质的表达，结构和功能特性，常用的标签是荧光标记。

简单的说，我想要给我感兴趣的蛋白质加一个荧光标签，这样我就可以观察这个蛋白质在细胞内的表达和分解情况。我知道目前常用的标签有荧光蛋白融合表达和抗体免疫反应法，然而这个两个方法我都不喜欢。

首先荧光蛋白融合表达我没法用。GFP和它的variants都太大了，有30kDa上下，我的目标蛋白在细胞内是有特定功能的，拖着这么个大家伙，其功能必受影响。并且，在末端加多肽片段会影响我目标蛋白质的稳定性，让它表现不自然。因此排除这个方法。

第二个方法嘛，比较依赖抗体，抗原/一扛的特异性很难保证。另外就是抗原在细胞体内，一/二抗是大分子蛋白质，他们进入细胞的前提是给细胞做穿透，这个穿透的效率是难以保证的。不可控因素较多，我不喜欢这个方法。

所以我想要问的是，有没有虫友做的课题里面涉及到了小分子label蛋白质的方法，如果有的话请您描述一下。我找到的小分子label要么是特异性都不好，识别多种相近短肽片段。要么就是含有特异性结构的蛋白质识别片段过长。如何才能让小分子label在不添加peptide tag的情况下直接识别我的目标蛋白本身呢？

研究遇到了问题，我猜想自己可能入陷入了自相矛盾的循环之中。因此，我希望看到帖子的您能帮我思考一下这个问题。
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1楼 2018-08-11 00:44:09
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Mr童先森

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
哈哈  刚刚没有仔细看，进行FITC标记的话需要进行异源表达纯化后，如果是在体内表达还是觉得用抗体把
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55楼2018-08-16 10:36:21
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liyushan_1

至尊木虫 (文坛精英)
★
厚德求是(金币+1): 谢谢参与
谢谢

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4楼2018-08-11 02:24:39
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xhmaohan3楼
2018-08-11 01:01   回复  
厚德求是(金币+1): 谢谢参与
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梦想天行5楼
2018-08-11 06:29   回复  
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dongmings7楼
2018-08-11 07:16   回复  
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心语飞扬11110楼
2018-08-11 07:30   回复  
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EGO18212楼
2018-08-11 07:36   回复  
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