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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 有什么常规的方法来验证C端His-tag的切除
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克拉苏斯

新虫 (初入文坛)

[求助] 有什么常规的方法来验证C端His-tag的切除

我们这边需要切除一个蛋白的C端His，之间加入了tev位点。

我为了节约时间，希望通过反挂后，再洗柱，通过看能挂上去的目的蛋白量来判断酶切程度。

而别人建议我改造一下，在His后加上FC以增大这个蛋白的大小，之后通过跑胶确定酶切程度。

他们给出的理由是有些蛋白也会跟Ni柱非特异性结合，这样就无法判断蛋白是否被酶切和酶切的程度。


目前想知道还有没有更好的方法来判断和验证这个酶切的结果，感谢！
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1楼 2018-08-07 17:11:11
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yedansky

新虫 (著名写手)
做一个western blot.切除和没切除做个对照，不知道这个行不行。

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2楼2018-08-07 17:17:37
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克拉苏斯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yedansky at 2018-08-07 17:17:37
做一个western blot.切除和没切除做个对照，不知道这个行不行。

感谢，我也想过western，但是感觉偏麻烦了点，如果有更合适的思路就好了
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3楼2018-08-07 17:24:18
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yedansky

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 克拉苏斯 at 2018-08-07 17:24:18
感谢，我也想过western，但是感觉偏麻烦了点，如果有更合适的思路就好了...

为什么一定要切除his标签呢

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4楼2018-08-07 17:50:24
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克拉苏斯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yedansky at 2018-08-07 17:50:24
为什么一定要切除his标签呢
...

甲方要求的，我也很想知道为什么，就算切了tev也会留另外6个氨基酸，图啥

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5楼2018-08-07 18:02:35
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