应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 有什么常规的方法来验证C端His-tag的切除
51/1返回列表
查看: 1916  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

克拉苏斯

新虫 (初入文坛)

[求助] 有什么常规的方法来验证C端His-tag的切除

我们这边需要切除一个蛋白的C端His，之间加入了tev位点。

我为了节约时间，希望通过反挂后，再洗柱，通过看能挂上去的目的蛋白量来判断酶切程度。

而别人建议我改造一下，在His后加上FC以增大这个蛋白的大小，之后通过跑胶确定酶切程度。

他们给出的理由是有些蛋白也会跟Ni柱非特异性结合，这样就无法判断蛋白是否被酶切和酶切的程度。


目前想知道还有没有更好的方法来判断和验证这个酶切的结果，感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-08-07 17:11:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yedansky

新虫 (著名写手)
做一个western blot.切除和没切除做个对照，不知道这个行不行。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2018-08-07 17:17:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克拉苏斯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yedansky at 2018-08-07 17:17:37
做一个western blot.切除和没切除做个对照，不知道这个行不行。

感谢，我也想过western，但是感觉偏麻烦了点，如果有更合适的思路就好了
赞一下 回复此楼
3楼2018-08-07 17:24:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yedansky

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 克拉苏斯 at 2018-08-07 17:24:18
感谢，我也想过western，但是感觉偏麻烦了点，如果有更合适的思路就好了...

为什么一定要切除his标签呢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2018-08-07 17:50:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克拉苏斯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yedansky at 2018-08-07 17:50:24
为什么一定要切除his标签呢
...

甲方要求的，我也很想知道为什么，就算切了tev也会留另外6个氨基酸，图啥

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2018-08-07 18:02:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 克拉苏斯 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭