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双荧光素酶报告基因的荧光读数会受到与其共转染的大分子蛋白的影响吗？
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各路大神好，最近在做我的蛋白对启动子的活性是否有调控作用，所以选用双荧光素酶报告基因的方法在做，根据文献报道，我的这个蛋白应该是对启动子的活性有一个正向调控的作用的，但是我的每一次结果却都是负向调控。再看了一下我的具体操作，我没看出问题…… 所以我怀疑会不会是因为我的蛋白分子量太大对荧光读数产生了影响，而不是因为其功能产生了作用。 我的具体操作是，将我pCAGGS-我的蛋白 和 pGL3-启动子以及RL-TK共同转染到24孔细胞板中，pCAGGS-我的蛋白 和 pGL3-启动子的转染量是1：1，转染后36h收样。然后在细胞孔中留75ul MEM，再把细胞刮下来，吸入不透光的那种96孔板中，加入75ul Luciferase Buffer，孵育10min，读数，再加入75ul的Stop&Glo Buffer，读数。 操作上我暂时没看出问题…… 但结果确实是相反的，所以我才考虑会不会是蛋白分子量太大对荧光读数产生了影响，但也许是小妹眼拙，还请各路大神帮忙分析分析，许是操作步骤出了问题也仍未可知…… |
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