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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PET28a重组质粒构建求助
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喵喵咪吖

新虫 (小有名气)

[求助] PET28a重组质粒构建求助 已有5人参与

请教万能的虫子们，我最近在构建PET28a重组质粒，目的基因1200左右，之前的pcr和酶切胶回收没有问题，回收之后跑胶观察亮度大概3:1，亮度很亮，构建体系是10ul，1ulbuffer，1ulT4连接酶，各4ul酶切产物，室温连接30min涂板过夜，无菌生长；第二次，网上看到浓度不能过高，稀释一倍，按原体系加入，室温连接1h，恢复，涂板过夜，无菌生长。请问大家，其中是否有什么问题？非常感谢！

@biostar2009 @youlinglyw @wizardfan @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2018-08-05 08:48:25
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喵喵咪吖

新虫 (小有名气)
补充，感受态是DH5，公司买的，应该没问题

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2楼2018-08-05 08:53:01
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韵，式

新虫 (小有名气)
平板抗性确认过吗

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3楼2018-08-05 08:57:13
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喵喵咪吖

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 韵，式 at 2018-08-05 08:57:13
平板抗性确认过吗

谢谢回复，平板抗性是对的，卡那

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4楼2018-08-05 08:59:00
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xmcsxq0606

新虫 (正式写手)
22度连 4度过夜试下

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5楼2018-08-05 09:38:01
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ttrying

新虫 (小有名气)
应该是没连上

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6楼2018-08-05 09:41:08
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喵喵咪吖

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xmcsxq0606 at 2018-08-05 09:38:01
22度连 4度过夜试下

谢谢回复，22度连30min吗？然后4度过夜再恢复涂板是吗？

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7楼2018-08-05 10:12:56
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喵喵咪吖

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ttrying at 2018-08-05 09:41:08
应该是没连上

谢谢回复，请问连接步骤有什么建议吗？

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8楼2018-08-05 10:13:43
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allegory

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2018-08-05 13:39:35
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ttrying

新虫 (小有名气)
很简单，在不确定因素的情况下，全部换新试剂。

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10楼2018-08-05 14:18:48
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