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sunxiaolin

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助:同源重组问题

各位大侠,有一问题请教,我现在在做中断,用到BW25113这个菌,我将PCR之后的抗性卡壳电转化进入BW中,进行文库质粒与卡壳之间的重组,长出菌落后,进行PCR验证,可是只有一条带,是安普抗性的卡壳没有插入我的基因中的条带,我想问,为什么抗性卡壳没插入文库质粒中,但是在含有安普的平板上却能长出菌落?多谢各位指教!
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gandalf886

银虫 (小有名气)

是挺卡壳的,BW是什么,安普是什么
2楼2009-04-01 18:58:21
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sunxiaolin

铜虫 (初入文坛)

BW是一种大肠杆菌,里面含有一个质粒,可以表达重组酶。
安普拉,是一种抗生素
3楼2009-04-02 08:55:31
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gandalf886

银虫 (小有名气)

我仔细看了一下,你是想把“安普拉”抗性片段同源重组到文库质粒上。
文库质粒是高拷贝的吧,而同源重组的概率本身又很低,一个“卡壳”可能与BW中的一个文库质粒发生重组,从而使BW具有安普拉抗性;而BW中可能剩余很多质粒是不发生变化的,所以p出来的片段还是跟以前一样啊。
还有,没准安普拉卡壳插到基因组上去了呢。

[ Last edited by gandalf886 on 2009-4-2 at 16:34 ]
4楼2009-04-02 16:32:24
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大飞370

铜虫 (小有名气)

做个空白菌对照,看是否是因为抗生素失效了。有可能是抗生素降解到不足以抑制野生菌生长的浓度了
5楼2009-04-02 18:03:51
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